罗小琴，赵 云，刘朝奇，邹云雷，李晓晓

0 引 言

微小RNA(microRNA, miRNA)是一类长度约21～25个核苷酸的非编码小单链RNA，通过与靶mRNA 3′非翻译区部分或完全互补，以促进其降解或抑制翻译，从而实现对靶基因转录后的调控。miRNA的异常表达与各种癌症相关，其不仅可作为肿瘤抑制基因或癌基因，还是肿瘤微环境的关键调节因子，在细胞增殖、分化、凋亡、迁移和侵袭等生物学过程中发挥重要的调节作用[1-2]。研究表明miRNA不仅可作为肿瘤诊断和预后的生物标志物，还可作为肿瘤免疫治疗的新靶标，对提高癌症患者生存率具有十分重要意义[3-4]。Cao等[5]研究发现，在脂肪肉瘤组织和细胞中miR-195表达降低，而通过上调miR-195的表达量可抑制肿瘤细胞的生长、增殖和迁移，并能促进肿瘤细胞的凋亡。Chen和Wang[6]研究发现，miR-195在肝癌细胞和血清中的表达下调，且miR-195表达水平与淋巴结转移和TNM分期有关，而通过使用miR-195模拟物来过表达miR-195可抑制肿瘤细胞的增殖，迁移和侵袭，表明miR-195可作为肝癌患者的新型诊断标志物参与肝癌的发展。在肿瘤微环境中，肿瘤细胞高表达的程序性死亡配体1(programmed cell death-Ligand 1，PD-L1)可与T细胞表面高表达的程序性死亡受体 1 (programmed cell death protein 1，PD-1)结合，持续激活PD-1/PD-L1信号通路，抑制T细胞的活化和增殖，诱导T细胞的功能丧失，从而使肿瘤细胞逃避机体的免疫监视和杀伤，而阻断 PD-1/PD-L1 信号通路可以逆转肿瘤免疫耐受状态，增强抗肿瘤免疫效应[7]。本研究旨在构建miR-195真核表达载体，研究其与肝癌细胞中PD-L1的关系及其对淋巴细胞增殖的影响，并通过生物信息学预测miR-195的靶基因，并对靶基因结合进行信号通路分析。……