裴美娟，孙中磊，黄生炫，刘英富，李学文

脑胶质瘤是一种高侵袭性的中枢神经系统恶性肿瘤，与其他神经系统肿瘤相比，脑胶质瘤有更高的转移趋势，整体预后较差及生存率较低[1,2]。目前，脑胶质瘤缺乏合适的治疗靶点，因此，临床迫切需要发现脑胶质瘤的致癌机制和新型靶向疗法。近年来，越来越多的证据表明，Hippo/YAP信号通路在中枢神经系统发育和脑肿瘤中有重要作用[3]，耗竭YAP或药物抑制YAP可能导致细胞死亡和细胞生长抑制[4]。有研究表明，RNF181可以稳定YAP蛋白并抑制K48连接的多聚泛素化，从而导致乳腺癌的进展[5]。RNF181作为E3泛素连接酶可以抑制抗原受体信号转导到CARD11下游NF-κB信号通路负调控淋巴瘤细胞生存[6]，但关于RNF181在脑胶质瘤中的功能报道较少。本研究通过探究RNF181与Hippo/YAP对胶质瘤细胞恶性度的影响及其可能机制，旨在为临床诊治提供帮助。

1 材料与方法

1.1 材料 人胶质瘤细胞系SHG-44(上海中科院细胞库)，DMEM培养液、胎牛血清、胰酶(美国Gibco公司)，过表达RNF181mRNA腺病毒表达载体AAVrh.10 RNF181与无表达基因腺病毒衣壳AAVrh.10 Negative(济南思科生物科技有限公司)，RNF181、YAP(美国abcam公司)，MTT、Trizol及去RNA酶试剂(美国Cayman Chemical公司)，RT-PCR引物(赛默飞世尔科技中国有限公司)。Tranwell小室、细胞培养板及计数板(美国康宁公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞与分组 SHG-44细胞在DMEM培养液常规培养，分为3组：对照组(Control组)、阴性对照组(Negative组)和RNF181过表达组(RNF181组)。Negative组和RNF181组SHG-44细胞分别加入等滴度纯化的腺病毒表达载体AAVrh.10 Negative、AAVrh.10 RNF181，Control组加入等体积PBS，共培养12 h。根据细胞的密度进行换液或者传代。每次传代时，加入2.5 μg/ml嘌呤霉素继续筛选稳定的细胞株，每隔1 d于荧光显微镜观察细胞GFP荧光强度，直至荧光强度无明显变化，无死亡漂浮的细胞。……