湛宝萍

本文采用荧光PCR法对牛肉掺杂肉成分进行检验，以不同比例混合的牛肉、猪肉与鸭肉为样品，分别采集样品DNA，根据不同源性设定特异性引物和探针。根据实验结果可知，该方法可有效检测出同等质量下三种肉质的DNA浓度差异、质量百分比，且误差不超过5%，通过该检测方式的应用，可对牛肉中掺杂肉成分进行准确有效检测。

材料与方法

试剂与设备 本实验主要试剂为动物基因DNA提取试剂盒、Tap DNA聚合酶、分析纯、引物和探针合成、人工全基因合成、无水乙醇。仪器为荧光PCR仪、高速冷冻离心机、绞肉机、电泳系统、恒温混匀仪、电子天平。

实验方法

（1）样本制备。本实验采用牛肉、猪肉和鸭肉，按照不同比例制备样品;

（2）DNA提取。选择50g动物肌肉样本，用绞肉机搅碎后，先将样本选取特定量放入2ml离心管内，将3.8μL蛋白酶K溶液放入混均仪中，温度设定66℃，时间为60min，间隔15min取出颠倒混匀后取出;提炼样本中的上清液，将其提炼出后沉淀晾干，加入49μL超纯水使其完全溶解，放入-18℃冰箱内存储备用。

（3）荧光PCR检测。PCR反应体系为35μL，循环参数设置为95℃，变性4min，再运行35个循环，每个循环94℃，变性30s;将各样本荧光PCR检测设定为平行样本，扩增Ct值选出两个样品的Ct值取均值;引物和探针阶段，为检测样本内牛肉、猪肉的质量百分比，以牛源性、猪源性、鸭源性基因为靶基因，设置特异性引物与探针[1]。

实验结果

特异 为检验该实验中设计引物的特异性，以猪、鸭、牛的DNA为模板，利用引物和探针扩增样本。根据实验结果可知，牛……