许美霞，周 贤，戴 仲，刘 涛，许 涛

(华中科技大学同济医学院附属普爱医院重症医学科，武汉 430034)

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)病死率与肺纤维化的程度密切相关，在ARDS的早期即有肺纤维化的发生，针对ARDS早期纤维增生的治疗是改善ARDS预后的重要措施[1-5]。在细胞外基质金属蛋白酶、抗蛋白酶和炎症介质相互作用下，肺成纤维细胞异常增生，导致胶原合成增加，是ARDS患者发生肺纤维化的重要机制[1-3]。本研究从ARDS肺纤维化的发病机制出发，研究细胞增殖抑制基因(HSG，又称线粒体融合蛋白2，Mfn2)是否可通过抑制成纤维细胞的增生成为防治ARDS肺纤维化的有效途径。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料

人胚肺成纤维细胞(HELF)购自中国科学院细胞资源库。内毒素(LPS)购自美国Sigma公司(批号14391)；rMnf2多克隆抗体(来源于鸡)和抗鸡二抗购自GenWay Biotech Inc公司；考马斯亮蓝法蛋白试剂盒及Sircol胶原测定试剂盒购自英国Biocolor公司。

1.2 方法

1.2.1人胚肺成纤维细胞(HELF)的培养

将冻存的HELF活化后，用含10%胎牛血清及双抗的DMEM培养基进行培养，12 h后更换新培养基。待细胞生长贴壁率达80%以上后进行消化传代，在倒置显微镜下观察细胞形态，选取细胞状态良好的HELF进行实验。

1.2.2LPS诱导HELF产生胶原

HELF常规培养，取对数生长期的细胞，予以不同浓度LPS(0.5、1、5、10 μg/mL LPS)刺激HELF，在各个时间点Sircol胶原测定试剂盒检测细胞内胶原蛋白水平。

1.2.3实验分组

将HELF分为对照组，LPS组，LPS+Adv-vector组，LPS+Adv-Mfn2组。(1)对照组：完全培养基培养。(2)LPS组：给予5 μg/mL LPS+培养液培养24 h。(3)LPS+Adv-vector组：腺病毒载体Adv-vector及LPS、DMEM培养基培养。(4)LPS+Adv-Mfn2组：腺病毒载体Adv-Mfn2及LPS、DMEM培养基培养。

1.2.4检测细胞内总蛋白及胶原蛋白水平