华晓敏，王昌明

(桂林医学院附属桂林市人民医院呼吸内科,广西桂林 541000)

细胞外信号调节激酶5(ERK5)是一种促分裂原活化蛋白激酶，在许多组织中普遍表达，并被多种细胞外刺激信号激活，以调节细胞增殖和分化、细胞存活、抗凋亡信号传导[1]。ERK5属于促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号家族，其氨基末端激酶结构域具有相对较大的羧基末端，由于此独特的结构和功能使其与其他MAPK成员区分开[2]。研究表明ERK5作为不同癌症的靶向因子，抑制ERK5活性或沉默ERK5在癌细胞中具有抗增殖活性，并在动物模型中阻断肿瘤生长[3]。已有研究发现ERK5抑制剂有缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用[4]，但其对减轻肺纤维化的机制尚未有充足的研究。本研究通过细胞实验探讨ERK5对成纤维细胞增殖、凋亡和自噬的调控及对成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响，为研究肺纤维化的发生机制提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 实验细胞

人肺成纤维样细胞系(HLFs)，细胞编号KCB200695，来源于中国科学院昆明细胞库。细胞培养箱条件：5% CO2、37 ℃培养箱。完全培养基：DMEM高糖培养基+10%胎牛血清(美国Gibco公司)+0.5%青霉素-链霉素混合液。

1.2 主要实验试剂

Recombinant Human转化生长因子β1(TGF-β1)2 μg粉剂(美国PeproTech公司)，用含海藻糖溶液溶解至10 μg/mL，分装后于-80 ℃储存。Vector-flag空载体、ERK5-flag(吉玛基因)各50 μg干粉分别经短暂高速离心后溶于50 μL ddH2O，溶解为1 μg/μL的储存液，分装后于-20 ℃储存。DMEM高糖培养基(美国Gibco公司)，胎牛血清(Gibco FBS-10099-141，美国Gibco公司)，1%青霉素及链霉素(美国Gibco公司)，0.25%含乙二胺四乙酸(EDTA)胰酶(美国Gibco公司)。α-SMA、Fibronectin、Bcl-2、Cleaved-Caspase3和增殖细胞核抗原(PCNA)一抗(美国Abcam公司)，辣根过氧化物酶标记过的二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)。……