韩斌，庞楠，余强

直肠癌是临床常见的消化系统恶性肿瘤。手术目前仍是直肠癌的主要治疗手段，可有效清除肿瘤组织，促进患者病情转归，延长生存时间。但部分患者术后病情仍持续进展，肿瘤细胞持续扩散、转移，不仅影响治疗效果，还将增加后续治疗实施的难度，病死风险提高[1]。故早期预测肿瘤细胞的各项生物学行为，有利于合理治疗的展开。血清肿瘤标志物是目前临床常用的诊断恶性肿瘤的重要参考指标，具有易于检测、操作简单等多个优点，且在判断疗效、预测肿瘤进展等方面也发挥关键性作用[2-3]。血清碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种具有多种功能的细胞因子，对成纤维细胞及血管内皮细胞等均有较强的促分裂及促增殖活性，与多种肿瘤均有密切联系[4]。富含半胱氨酸蛋白61(Cry61)是CNN家族成员之一，在人体细胞内广泛存在，不仅能够调节细胞外基质形成，还具有影响细胞增殖、凋亡等多种作用，参与肿瘤的发生和发展[5]。结合bFGF和Cry61二者的特点，推测bFGF、Cry61可能与直肠癌的癌性生物学行为也有一定联系。本资料主要观察直肠癌患者血清bFGF、Cry61表达水平与患者癌性生物学行为的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年2月—2020年5月中国人民解放军联勤保障部队第九九〇医院信阳院区收治的80例直肠癌患者。其中男45例，女35例；年龄40～59(49.57±2.16)岁；肿瘤直径1.3～3.7(2.27±0.28)cm。伦理委员会对本次研究设计内容知情，并批准同意实施，患者及家属均知晓本次研究内容，签署知情同意书。

1.2 入选标准 (1)纳入标准：①符合《中国结直肠癌诊疗规范(2015版)》中直肠癌相关诊断标准[6]，并均经影像学、病理学检查确诊；②均接受手术治疗；③预计生存时间>3个月。(2)排除标准：①其他恶性肿瘤；②盆腹腔粘连的患者；③近1个月内服用影响胃肠道动力及胃肠激素分泌药物的患者；④有精神障碍或心理疾病无法很好的配合研究内相关检查的患者；⑤既往有腹部手术史的患者。

1.3 方法

1.3.1 癌性生物学行为判定方法 以手术病理结果结果为准，主要的生物学行为包括肿瘤细胞转移和扩散、分化程度和病理分期情况，其中病理分期依据恶性肿瘤国际临床病期分期(TNM)[7]分期，分为Ⅰ～Ⅲ期；分化程度包括低分化、中分化和高分化。

1.3.2 实验室指标检测方法 (1)血清bFGF检测方法：采集全部患者入院时的空腹外周静脉血4 mL，进行离心处理，以3 000 r/min的离心速度共离心15 min，离心完毕后取上清液，放置于-20 ℃的冰箱内待检。使用美国R&D Systems公司的试剂盒，采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定血清bFGF表达情况。(2)血清Cry61检测方法：采集全部患者入院时的空腹外周静脉血4 mL，室温静置30 min后进行离心处理，以3 000 r/min的离心速度共离心20 min，离心完毕后取上清液，放置于-70 ℃的冰箱内待检。使用美国R&D Systems公司的试剂盒，采用酶联免疫吸附试验法测定血清Cry61表达情况。

2 结果

2.1 癌性生物学行为分布 80例患者45例低分化、35例中高分化，31例转移扩散，39例为Ⅰ期、24例为Ⅱ期、17例为Ⅲ期。见表1。

表1 癌性生物学行为分布

2.2 不同癌性生物学行为血清bFGF和Cry61水平比较 肿瘤细胞转移、扩散患者和Ⅲ期患者的血清bFGF、Cry61表达均高于肿瘤细胞未转移、扩散患者和Ⅰ～Ⅱ期患者，差异有统计学意义(P<0.05)，但不同分化程度间和Ⅰ、Ⅱ期患者间的血清bFGF、Cry61表达比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同癌性生物学行为血清bFGF和Cry61水平比较

2.3 血清bFGF、Cry61表达对直肠癌不同癌性生物学行为的影响分析 将各血清指标作为自变量，分别将肿瘤细胞有无转移、扩散(1=有，0=无)、TNM分期情况(1=Ⅲ期，0=Ⅰ～Ⅱ期)作为因变量，经二元Logistic回归分析后，将全部资料纳入建立多元回归模型，结果显示，血清bFGF、Cry61高表达是直肠癌患者肿瘤细胞转移、扩散和TNM高分期的风险因子(OR>1，P<0.05)。见表3。

表3 血清bFGF和Cry61表达对直肠癌不同癌性生物学行为的影响分析

2.4 血清bFGF、Cry61表达预测直肠癌不同癌性生物学行为的效能分析 将直肠癌患者肿瘤细胞有无转移、扩散(1=有，0=无)、TNM分期情况(1=Ⅲ期，0=Ⅰ～Ⅱ期)作为状态变量，将直肠癌患者的血清bFGF、Cry61表达情况作为检验变量，绘制ROC曲线(见图1～2)，结果显示，血清bFGF、Cry61单独和联合预测直肠癌患者肿瘤细胞转移和扩散、TNM高分期风险的AUC均>0.80，有一定预测价值。各指标及联合预测对应最佳阈值、特异度、灵敏度及约登指数见表4。

表4 血清bFGF、Cry61表达预测直肠癌不同癌性生物学行为的效能分析

图1 血清bFGF、Cry61表达预测直肠癌肿瘤细胞转移、扩散风险的ROC曲线图

图2 血清bFGF、Cry61表达预测直肠癌高分期风险的ROC曲线图

3 讨论

早期诊断和手术治疗虽可延长直肠癌患者的生存时间，但部分患者术后仍有肿瘤细胞转移、扩散的癌性生物学行为风险，增加病死率[8]。文献指出，恶性肿瘤的发生、发展与血管生成、细胞凋亡等过程密切相关，且多种蛋白质物质和细胞因子也参与了该过程[9]。故血清肿瘤标志物的检测对直肠癌的诊断、疗效观察及病情进展预测均有重要意义。

血管新生刺激因子及血管新生抑制因子在正常情况下处于平衡状态，但在肿瘤状态下，肿瘤可介导大量的血管新生刺激因子合成分泌，加速内皮细胞增殖，促进新毛细血管生成，从而满足不断增加的肿瘤细胞对营养物质及氧的需求[10]。并且，新生血管可为肿瘤细胞提供良好的代谢产物排泄途径，促使肿瘤不断增长[11]。血清bFGF是目前临床所了解的作用较强和特异性较高的血管新生正调控因子，不仅可为神经内胚层和中胚层的有丝分裂活性提供良好条件，促进血管内皮细胞分裂、增殖，还可增强血管通透性，从而促进新生血管形成，在肿瘤发展、发展中发挥关键作用[12-13]。血清Cry61是CNN家族中最先被发现的一个成员，其主要位于人染色体1p22.3区域，且结构中存在大量的半胱氨酸[14]。血清Cry61可诱导成纤维细胞的增殖，促进细胞外基质合成分泌，还可趋化有丝分裂，提高其活性，参与胚胎发育形成、血管生成等多个过程[15]。同时，血清Cry61还可调节细胞的增殖和分化，从而参与肿瘤的发生、发展等过程[16]。本资料结果显示，肿瘤细胞转移、扩散患者、Ⅲ期患者的血清bFGF、Cry61表达均高于肿瘤细胞未转移、扩散患者和Ⅰ～Ⅱ期患者，初步提示血清bFGF、Cry61表达在直肠癌患者不同的癌性生物学行为中存在差异，随着血清bFGF、Cry61表达随之升高，肿瘤细胞转移扩散发生风险增加及病理分期升高。究其原因：血清bFGF可通过促进血管内皮细胞增殖、增强血管通透性等过程为肿瘤生长提供足够营养，从而使肿瘤细胞大量增殖、迁移，进而促进病情发展和转移、扩散[17]。血清Cry61可与细胞膜上配体结合，增强整联蛋白偶联激酶活性，继而激活信号通路，促进肿瘤发生和发展。并且血清Cry61还可促进血管内皮生长因子和其受体表达，促进血管内皮细胞增殖，并激活下游靶基因，从而调节新生血管的形成[18]。故认为血清Cry61水平失调可能作为启动因子，引起下游细胞外基质合成及分解失调等病理过程，从而促进肿瘤进展与转移。为了进一步明确血清bFGF、Cry61表达与直肠癌患者癌性生物学行为的关系，本资料行回归分析结果显示，血清bFGF、Cry61过表达均是直肠癌患者肿瘤细胞转移、扩散和TNM高分期的风险因子；最后绘制ROC曲线结果显示，血清bFGF、Cry61单独和联合预测直肠癌患者肿瘤细胞转移和扩散、TNM高分期风险的AUC均>0.80，预测价值均较理想，上述结果均提示，血清bFGF、Cry61表达与直肠癌患者癌性生物学行为有关，并可作为直肠癌患者癌性生物学行为预测标志物。

综上所述，直肠癌患者癌性生物学行为可能与血清bFGF、Cry61过表达有关，临床可考虑通过早期监测直肠癌患者的血清bFGF、Cry61表达，来指导早期合理治疗方案的拟定，积极控制血清各指标水平表达，可能对控制疾病、促进良性预后有积极意义。