任婷玉，聂赫中容 ,肖利佳，林芳楠，王大明，宋春丽，周义文

1 南方医科大学深圳医院 检验科，广东 深圳 518000；2 吉林大学第一医院 基因诊断中心，长春 130012

HBV的持续感染是导致肝炎肝硬化和肝细胞癌发生最主要的因素之一[1]。慢性HBV感染者比未感染者发生肝癌的风险高25～37倍[2]。部分HBV感染者将经历漫长的肝细胞损伤，修复，再损伤，进而发生肝纤维化，如不及时干预，最终可能在肝硬化的基础上进展为肝细胞癌[3]。肝星状细胞(HSC)的持续激活是肝纤维化发生发展过程中的关键环节，HSC是细胞外基质的主要来源，各种致纤维化因素均把HSC作为最终靶细胞[4]。正常情况下HSC处于静止状态，当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时，HSC被激活。肝细胞是肝脏的实质细胞，占肝脏细胞数量的80%，导致肝细胞损伤的疾病通常会引起肝实质损伤以及肝脏微环境的改变，直接或间接地促进HSC活化[5]。

本研究拟通过应用稳定表达HBx蛋白的LO2细胞系的培养上清液作为条件培养基干预人HSC系LX-2来模拟HBV感染肝细胞的状态，探索HBV感染的肝细胞对HSC活化和增殖的影响及可能的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 临床样本 收集2020年11月— 2021年1月在南方医科大学深圳医院诊断为慢性乙型肝炎患者血浆30份、乙型肝炎肝硬化患者血浆42份、肝细胞癌患者血浆30份及同期在本院体检的健康人群血浆18份。

1.1.2 细胞和试剂 人HSC株LX-2、人肝细胞株LO2(中科院上海细胞库)；HBx过表达和对照慢病毒(广州莱德尔生物)；培养基及胎牛血清(美国Gibco)；鼠抗人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、鼠抗人α1-Ⅰ型胶原(Col1A1)、鼠抗人GAPDH抗体均为美国Proteintech公司生产；……