魏春阳,齐国先,王衍富，张 华，张多多

(1.中国医科大学附属第一医院 老年医学科，辽宁 沈阳 110001；2.大连医科大学附属第一医院 老年医学科，辽宁 大连 116011；3.大连医科大学附属第一医院 心律失常科，辽宁 大连 116011)

血管老化是心脑血管疾病一个重要的危险因素，管腔扩张和管壁增厚是血管老化最明显的结构特点，导致弹性动脉僵硬度增加、顺应性下降，同时血管修复、新生能力降低。血管平滑肌细胞衰老是血管老化主要机制之一，老化增厚的血管主要由肥大的平滑肌及间质构成。肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis， TWEAK)是配体超家族的新成员之一，与动脉粥样硬化密切相关，并参与心血管重塑的几种病理过程[1]，但TWEAK及其受体是否参与血管老化进程，目前尚未见研究涉及。本研究通过观察TWEAK及其受体成纤维细胞生长因子诱导蛋白14(fibroblast growth factor-inducing protein 14，Fn14)在血管平滑肌细胞衰老时的表达及作用，拟对TWEAK在血管老化中的作用有初步的认识。

1 材料和方法

1.1 实验样品及试剂

大鼠主动脉平滑肌细胞(A10细胞,万类生物ATCC来源，货号CRL-1476)、细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色试剂盒(Solarbio公司)、人AngⅡ(Aladdin公司)、TWEAK过表达腺病毒及其对照(GFP荧光标记)、TWEAK抗体(Abcam公司)、Fn14抗体(Bioss公司)、P53抗体(Abcam公司)、P21抗体(Rockland公司)。

1.2 血管平滑肌细胞培养与分组

A10细胞 10%胎牛血清培养基，于 37 ℃、5% CO2培养箱中培养3～5代。先将A10细胞分为对照组及AngⅡ组，经无血清培养24 h使细胞同步化后，对照组10%血清培养基培养，AngⅡ组10%血清培养基加1×10-7mol/L的AngⅡ培养1、3、7 d，检测各组细胞衰老情况。再将A10细胞分为对照组、未感染组、空载体组及TWEAK过表达组，经无血清培养24 h后，对照组、未感染组不做转染，空载体组及TWEAK过表达组分别转染空载体腺病毒及TWEAK过表达腺病毒。……