陈玲，王学方，李智宁，范毅，宁二娟，李健，李晓

（河南省科学院河南省生物技术开发中心，河南省纳普生物技术有限公司，河南郑州450008）

1 材料与方法

1.1 材料

信阳毛尖：信阳市浉河区青云茶叶专业合作社提供；β-葡萄糖苷酶（≥200U/g）、果胶酶（≥60000U/mL）、纤维素酶（≥11 000 U/g）、中性蛋白酶（≥50 000 U/g）：夏胜生物科技开发有限公司。癸酸乙酯（纯度99%）：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；二氯甲烷、无水硫酸钠（均为分析纯）：天津市致远化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

GC-MS QP2010Ultra气相色谱质谱联用仪：日本岛津公司；同时蒸馏萃取（simultaneous distillation and extraction，SDE） 提取器、HH-4Y电热恒温水浴锅：上海启前电子科技有限公司；SHSL调温电热套：上海树立仪器仪表有限公司；SB-1100旋转蒸发仪：日本东京理化器械株式会社；ME204电子分析天平：梅特勒-托利多国际股份有限公司；SANYO医用低温箱：日本三洋公司。

1.3 方法

1.3.1 气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）分析条件

GC 条件：Rxi-5MS（30.0 m×0.25 mm，0.25 μm）石英毛细管柱。 进样口温度250℃，载气为He气，柱流量为1.5 mL/min，升温程序：初始温度为100℃，先以10℃/min升至260℃，再以20℃/min升温至300℃（保持 10 min），分流比 5∶1。

MS条件：离子源为电子轰击电离源（EI），离子化电压70 eV，离子源温度250℃，质谱扫描范围40 amu～500 amu，检测器电压0.88 kV。

1.3.2 提取制备方法

β-葡萄糖苷酶辅助提取香气成分：绿茶粉碎，过40目筛，取20 g，置于圆底烧瓶中，加200 g蒸馏水，加0.5%β-葡萄糖苷酶，调pH值至4.5～5.0，50℃保温酶解1 h，加1 mL癸酸乙酯（浓度98.83 g/mL），放置于电热套上，连接SDE装置，另一端连接另一圆底烧瓶，烧瓶中加入30 mL二氯甲烷，放置于水浴锅上，水浴锅温度设置55℃，电热套加热使水保持微沸，同时蒸馏萃取2 h，萃取液采用无水硫酸钠和冷冻结合除水，然后用低温减压浓缩，温度为30℃，除去溶剂，称重，加2 mL二氯甲烷溶解，0.45 μm滤膜过滤即得，样品冷冻保存。……