常恒祯，常江，战俊澎，杨馨，郭珣，刘益辛，邹德颖，2，任洪林

1.吉林大学人兽共患病研究教育部重点实验室／动物医学学院／人兽共患病研究所，吉林长春130062；2.辽宁省盘锦检验检测中心，辽宁盘锦124000

目前应用最广泛的重组蛋白表达系统为E.coli原核表达［1］，但由于蛋白表达速度过快、不正确折叠或多肽链疏水区域间非特异性相互作用等原因［2］，该系统表达的蛋白多以无活性的包涵体形式存在，难以获取可溶性目的蛋白［3］。目前，多通过缩短表达时间及降低IPTG浓度来降低包涵体表达量［4］；另有研究在培养基中加入金属离子，或使用麦芽糖结合蛋白（maltose binding protein，MBP）标签等增加可溶性表达［5-6］。但这些方法均未达到理想效果，部分蛋白仍稳定表达于包涵体中，且表达量较低，另外，制备抗体不宜加入MBP标签蛋白，因其可能干扰目标蛋白的正确结构和功能［7］，且不保证可溶性蛋白正确折叠［8］。

因此，增加包涵体蛋白的表达量及纯化量显得尤为重要。本研究通过优化包涵体蛋白表达条件及对3种常用包涵体纯化方法（切胶、包涵体复性及Ni-NTA亲和层析纯化）进行比较，获得最佳表达及纯化方法，以期提高包涵体表达量及可溶性蛋白纯化量。

1 材料与方法

1.1 菌株及质粒 感受态E.coli DH5α、E.coli BL21（DE3）、E.coli BL21（DE3）PLysS及E.coli BL21-Codon Plus（DE3）-RIPL购自上海唯地生物技术有限公司；全长IL-1β与全长IL-1Ra重组质粒［9］（以下简称IL-1β-1Ra-2重组质粒）、全长IL-1Ra重组质粒由吉林大学人兽共患病细菌室保存。

1.2 主要试剂 IPTG购自北京博奥拓科技有限公司；KCl、NaH2PO4及Na2HPO4购自北京化工厂有限责任公司；EDTA、Tris、Urea购自广州赛囯生物科技有限公司；……