杨祥，徐长征，陈金华，孟胜利，王泽鋆，申硕，陈晓琦

1.武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室，湖北武汉430207；2.国家联合疫苗工程技术研究中心，湖北武汉430207

手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）是一种由多种人肠道病毒（human enteroviruses，HEVs）引起的急性传染疾病，多发于5岁以下儿童。临床症状表现为手、足、口、臀等部位出疹及发热等多种临床症状。2008年5月2日，HFMD被纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的丙类传染病进行管理。在中国，2012年前引起HFMD的主要病原为肠道病毒71型（enterovirus A71，EV-A71）和柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus A16，CV-A16）［1-4］。近年来，柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A6，CV-A6）、柯萨奇病毒A组10型（Coxsackievirus A10，CV-A10）等病原导致的HFMD在印度、东亚、日本、欧洲等地持续增加［4-9］，已成为HFMD的主要病原，为HFMD的防控带来更大的挑战。本研究以武汉生物制品研究所有限责任公司生产的EV-A71疫苗Ⅳ期临床研究为基础，分析EV-A71疫苗干预后，HFMD相关肠道病毒病原谱的变化及分子流行病学特征，为HFMD的预防及多价HFMD疫苗的研发和临床研究提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 标本 采集湖北省潜江市2019年5—12月，谷城县2019年6—12月诊断为HFMD的患儿肛拭子样本，于-80℃保存待检。诊断标准参照《手足口病诊疗指南》（2018年版）。

1.2 主要试剂及仪器 核酸提取试剂盒购自生工生物工程（上海）股份有限公司；EV-A71型 ／CV-A16型／CV-A10特异性及肠道病毒通用型RNA检测试剂盒购自硕世生物科技股份有限公司；Prime ScriptTMⅡ1st Strand cDNA Synthesis Kit和TaKaRa LA Taq购自宝日医生物工程（北京）有限公司；ABI7500型荧光定量PCR仪和梯度PCR仪购自美国Applied Biosystems公司。

1.3 病毒R N A的提取 用核酸提取试剂盒提取样本RNA，-80℃保存待用。

1.4 肠道病毒型别鉴定 提取的RNA用EV-A71型／CV-A16型／CV-A10特异性及肠道病毒通用型RNA检测试剂盒，通过ABI7500型荧光定量PCR仪进行检测。……