杨勇，吴永超，张飞伟，杨坤，闵宪捷，刘佐军，雍雪飞，刘少祥，潘海龙

成都生物制品研究所有限责任公司，四川成都610023

百日咳杆菌经发酵罐培养、纯化、脱毒后，获得百日咳疫苗原液，用于制备吸附无细胞百白破联合疫苗，百日咳毒素（pertussis toxin，PT）和丝状血凝素（filamentous haemagglutinin，FHA）是疫苗中最主要的抗原成分［1-4］。脱毒工艺主要是对PT进行脱毒［5］，若PT含量占比过高，将导致脱毒不完全；占比过低，将造成脱毒过度，影响PT的免疫原性。因此，原液中PT的含量比例直接影响脱毒效果，从而影响成品疫苗的毒性指标和效价。受共纯化工艺限制，生产过程中PT与FHA未进行分离，需共同进行纯化和脱毒，无法改变单一批次原液中PT和FHA含量配比［1］，因此，需在培养过程中进行调控。

百日咳杆菌生长环境的改变将影响抗原表达水平［6-8］，可通过控制培养参数调控抗原的表达水平。百日咳杆菌为好氧菌［9］，高溶氧水平有利于其生长，但不利于产毒阶段PT的表达。适当提高细菌生长阶段的溶氧水平，降低产毒阶段的溶氧水平，有利于PT的表达［10］。高剪切力对FHA有一定破坏力，在不影响细菌生长的低溶氧水平下，降低剪切力，适当提高产毒阶段的溶氧，可使FHA含量处于较高水平。目前，提高溶氧的途径有改变搅拌转速、挡板、纯氧通气量、罐内压力、搅拌叶片形状等，可通过多种控制手段组合实现发酵过程中的溶氧控制。因此，本实验通过设计不同的参数组合方案来控制溶氧水平，比较发酵物中PT和FHA的表达量来确定最佳方案。

1 材料与方法

1.1 菌种 百日咳杆菌58003（cs）株来自中国食品药品检定研究院，由成都生物制品研究所有限责任公司（简称成都公司）细菌性疫苗一室保存。……