刘浩明，华 毛，张 莉，朱海宏

(青海省第五人民医院1.胸外科；2.头颈外科，青海 西宁810007；3.青海省人民医院 胸外科，青海 西宁810007)

肺缺血/再灌注损伤(lung ischemia-reperfusion injury, LI/RI)是指肺组织经历一定时间缺血再次恢复血流供应后，其功能代谢障碍及结构功能破坏出现加重的现象，是肺移植手术失败和患者死亡的主要原因[1-3]。低氧诱导因子-1 α(hypoxic inducible facter 1α，HIF-1 α)/血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A，VEGFA)信号通路与LI/RI密切相关，HIF-1 α是调节细胞氧稳态的核心转录因子，VEGF可促血管生成，该信号通路可在缺氧条件下被激活[4-5]。蛋白激酶D(protein kinase D，PKD)属于丝/苏氨酸蛋白激酶家族，研究报道，PKD2的表达可能影响组织缺血/再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury, I/RI)后的细胞修复反应，在维持血管壁完整性、稳定性中具有重要作用，但PKD2在LI/RI中的作用尚不清晰[6]。本研究建立小鼠LI/RI模型，以HIF-1 α/VEGF信号通路为切入点，探讨PKD2对LI/RI的影响及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：SPF级C57BL/6J野生型(WT)小鼠20只(北京维通利华实验动物技术有限公司)；PKD2基因过表达(PKD2+/+)小鼠40只(Jackson实验室)。实验小鼠均为6～8周龄，体质量18～22 g，雌雄各半。实验动物及饲养条件符合《实验动物管理条件》要求。

1.1.2 试剂(盒)：戊巴比妥钠、HE染色试剂盒、RIPA裂解液、PMSF、脱脂奶粉、ECL发光液、PVDF转印膜和Trizol(北京索莱宝科技有限公司)；2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol，2ME)、蛋白定量试剂盒、蛋白Marker(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)；TNF-α、IL-1β、IL-6 ELISA试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技有限公司)；引物(TaKaRa公司)；HIF-1 α、VEGFA、GAPDH兔源重组单克隆抗体，羊抗兔二抗(CST公司)；中性树胶(国药集团化学试剂有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物的分组及处理：将C57BL/6J WT小鼠和C57BL/6J PKD2+/+小鼠分别随机分为……