贾春松，赵彦坡，尚振华，邢添瑛，欧彤文*

(1.首都医科大学宣武医院 泌尿外科， 北京 100053； 2.门头沟区医院 神经内科， 北京 102300)

骶上脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)通常导致神经源性膀胱(neurogenic bladder，NB)，表现为逼尿肌过度活动(detrusor over activity，DO)和膀胱纤维化等膀胱功能和结构异常以及尿急、尿频、尿失禁和尿潴留等临床症状。转化生长因子β (transforming growth factor β，TGF-β)是调节细胞生长、分化和免疫功能的细胞因子之一[1]，其中，TGF-β1是促进组织纤维化的重要因子[2]，它可能是治疗NB的靶点。但是，目前相关研究较少。在本研究中，用慢病毒介导的短发夹RNA(sh-TGF-β1)靶向干扰膀胱TGF-β1 mRNA表达，并从膀胱功能和纤维化两个方面，探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)降低膀胱TGF-β1表达，治疗脊髓损伤大鼠NB的可行性。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂：PCR引物(上海吉凯基因医学科技股份有限公司)； DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；Trizol试剂(Invitrogen公司)；Prime-Script RT试剂盒和一步法SYBR RT-qPCR试剂盒(TaKaRa公司)；兔抗TGF-β1单克隆抗体(Abcam公司)；小鼠抗GAPDH单克隆抗体、HRP标记的山羊抗兔IgG和HRP标记的山羊抗小鼠IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)；12.5% SDS-PAGE凝胶、PVDF膜(Bio-Rad公司)；TGF-β1 RNAi慢病毒载体LV-shTGF-β1及其对照慢病毒载体LV-vector为本实验室既往构建[3]。

1.1.2 动物：Wistar雌性大鼠[北京维通利华，使用许可证号：SYXK(京)2017 -0033]，SPF级，体质量(200±10)g。

1.2 方法

1.2.1 大鼠的分组及处理：将大鼠随机分为4组：假手术组(sham)、T10脊髓横断组(T10 transec-tion)、LV-vector和LV-shTGF-β1组，每组12只。将大鼠用2%异氟醚麻醉后，假手术组行T10脊髓横断假手术，其余3组行T10脊髓横断。脊髓术后，下腹部正中开口，行膀胱肌层注射(每只80 μL)：假手术组和T10脊髓横断组为0.9%氯化钠溶液，LV-vector组为LV-vector 1×108pfu/只，LV-shTGF-β1组为LV-shTGF-β1 1×108pfu/只。大鼠膀胱壁注射方法和术后护理见既往报道[4]。……