唐婉军，彭小忠，2*，韩 为*

(1.中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 生物化学与分子生物学系 医学分子生物学 国家重点实验室 医学灵长类研究中心 神经科学中心， 北京 100005； 2.中国医学科学院 医学生物学研究所，云南 昆明 650118)

胶质瘤(glioma)是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤。在胶质瘤中，异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase 1, IDH1)是最重要的分子标志物之一。胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)属于恶性程度最高的胶质瘤，其中IDH1野生型较为常见，而IDH1突变型仅占10%[1]。与IDH1突变型患者相比，IDH1野生型患者预后较差，放射化学药物治疗(简称放化疗)效果不佳[1-2]。以往针对IDH1的研究多关注该催化酶发生突变后在代谢和基因调控中的作用[3]，而野生型IDH1表达失调对基因表达的影响尚不清楚。IDH1在胶质瘤中的关键地位决定了对其进行广泛而深入研究的必要性。

RNA结合蛋白(RNA binding proteins, RBPs)通过RNA结合结构域与目的RNA相结合[4]，在基因表达调控中发挥重要作用。RBPs广泛参与多种细胞生物过程，如中间代谢、抗病毒反应、信号传导和蛋白质代谢等，并且RBP-RNA相互作用网络的失调在肿瘤和神经退行性疾病中可作为一种驱动因素[5]。本研究旨在探究IDH1表达失调能否影响RBPs的表达，为进一步理解IDH1在胶质瘤中的关键作用提供更广阔的思路。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系：人神经胶质瘤细胞系LN229(ATCC)。

1.1.2 主要试剂：Trizol (Ambion 公司)；RNA纯化试剂盒(Qiagen公司)；反转录试剂盒(Vazyme公司)；SYBR (TaKaRa公司)；IDH1抗体(Abcam公司)，IDH1R132H(Dianova公司)，β-actin 抗体(Sigma-Aldrich 公司)，慢病毒及感染试剂(上海吉凯基因有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 慢病毒感染构建IDH1敲低、过表达和R132H突变的细胞株: 慢病毒载体构建和包装均委托上海吉凯基因有限公司。……