乔兵兵 李世朋 宋浩森 季敏 赵龙栓

肝脏缺血-再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury，IRI）是常见的临床问题，其发生机制错综复杂[1-3]。细胞焦亡是一种依赖于半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspase），并伴有大量促炎因子释放的程序性细胞死亡，在细胞损伤、炎症反应等病理生理过程中具有重要作用[4-5]。研究发现细胞焦亡可参与肝细胞的损伤与修复[6]，但磷酸甘油酸变位酶5（phosphoglycerate mutase 5，PGAM5）调控细胞焦亡参与肝脏 IRI的分子机制并不明确。本项目通过研究PGAM5/Caspase-1/Gasdermin D（GSDMD）信号通路调控细胞焦亡的分子机制，以明确PGAM5调控细胞焦亡在肝脏IRI过程中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料与试剂

雄性C57小鼠30只，体质量（22.0±2.0）g，清洁等级为无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级，由郑州大学第一附属医院实验动物中心提供。小鼠正常肝细胞AML12细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所。Caspase-1抑制剂Z-YVAD-FMK购于上海蓝木化工有限公司，PGAM5 小干扰核糖核酸（small interfering ribonucleic acid，siRNA）及 siRNA 阴性对照（siRNA-negative control，siRNA-NC）均购于广州锐博生物公司；PGAM5、NOD样受体蛋白3（NOD-like receptor protein 3，NLRP3）、Caspase-1、 裂 解Caspase （cleaved Caspase）-1、GSDMD与甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗体购于英国Abcam公司；蛋白定量试剂盒、RNA反转录试剂盒均购于北京百普赛斯生物科技有限公司；肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α试剂盒、白细胞介素（interleukin，IL）-1β试剂盒、免疫组织化学（免疫组化）试剂盒及免疫荧光试剂盒均购自郑州赛默斯生物科技有限公司。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）试剂盒购于德国 Roche公司。四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）试剂盒购于美国Sigma公司。

1.2 小鼠肝脏IRI模型建立与分组

建立小鼠肝脏IRI模型的方法参考文献[7]，缺血1 h后松开血管夹，然后关闭腹部切口。……