袁 媛，王彩霞，熊菲菲，雷 蕾，吴小艳，贾福怀

（宁波御坊堂生物科技有限公司，浙江宁波 315012）

胶原蛋白是一种广泛分布在各类动物的皮肤、骨骼中的蛋白质，一般呈纤维状，分子量较大，主要分布在细胞外基质中[1-2]。Ⅰ型胶原蛋白是组织中分布较广泛的胶原蛋白，主要存在于脊椎动物的结缔组织中[3]。斑马鱼肌肉和皮肤中胶原蛋白的主要成分是Ⅰ型胶原蛋白，鱼类的蛋白肽链包含2个α1和一个α2链，分别由COL1A1A，COL1A1B和COL1A2所编码[4]。胶原蛋白肽是胶原蛋白经过酶解使其分子链解体、断裂得到的一种产品，由2个或2个以上的氨基酸组成的蛋白质结构片段，其分子量为300 Da左右，分子量较小，易于吸收[5]。研究表明，胶原蛋白肽具有抗氧化性、美白护肤、保护肝脏等多种功效[6-8]。通过探究胶原蛋白肽饮品对斑马鱼胶原蛋白基因表达的影响，为生物体内胶原蛋白的生成促进关系提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

试验所使用的动物为野生型AB系斑马鱼，年龄为受精后5 d（5 dp）f。

养鱼水质：28℃下将200 mg速溶海盐加入1 L反渗透水，电导率为480~510μS/cm，pH值为6.9~7.2，硬度为53.7~71.6 mg/L CaCO3。

1.2 材料与试剂

胶原蛋白肽饮品（由胶原蛋白肽、果汁等组成），自制；1725121，iTaq Universal SYBR Green Supermix，Bio-rad公司提供；pr1701，2×Taq Master Mix，北京百泰克公司提供；1382739，TRI reagent，Invitrogen公司提供；T130144氯仿、E111963无水乙醇，阿拉丁公司提供；FastQuant RT Kit（With gDN-ase） 试剂盒（KR106天根）；A507048异丙醇，上海生工公司提供。

1.3 试验方法

1.3.1 胶原蛋白肽饮品最大检测质量浓度（MTC）测定

随机选取180尾5 dpf（受精后5 d） 野生型AB品系斑马鱼，放置在六孔板（容量3 mL），每孔中30尾斑马鱼。给予胶原蛋白肽饮品不同质量浓度，分别为6.25，12.50，25.00，50.00，100.00μL/mL，同时设置正常对照组。……