李建刚 李亮 帕合热迪尼·玉素莆 马博

胃癌是消化道常见恶性肿瘤之一，中晚期病人疗效不佳，预后差[1]。肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSCs)是肿瘤复发、侵袭、转移及耐药的根源，已在多种恶性肿瘤中发现CSCs的存在[2]。研究发现，多种miRNAs参与调控胃癌干细胞(gastric cancer stem cells,GCSCs)的恶性生物学行为[3]。miR-711是最近发现的一种miRNA，在多种恶性肿瘤组织中低表达[4-6]。近年来研究发现，过表达miR-711能抑制SGC-7901细胞的干性指标SOX2的表达，同时抑制与肿瘤耐药相关的基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达[7]。我们从TCGA及Metabolic gEne Rapid Visualizer等数据库分析显示胃癌组织和胃癌细胞株中miR-711低表达，正常胃黏膜组织中miR-711高表达。但是miR-711是否可影响GCSCs的干性目前尚不清楚。本研究分析miR-711对GCSCs干性特征的影响。

材料与方法

一、主要试剂、细胞株及仪器

人胃癌干细胞CSC-G、人胃癌细胞株 MKN-45(美国ATCC细胞库)。RPM11640培养基、胰蛋白酶、胎牛血清、双抗(Gibco，美国)；miR-711 mimics、miR-NC对照质粒、引物序列、MUT-CD44和 WT-CD44(上海生物工程公司)；兔抗人Bmi1、Sox2、Oct4、CD44、β-actin多克隆一抗、鼠抗兔单克隆二抗(Jackson公司，美国)；荧光素酶检测试剂盒(BioVision公司，美国)；Western Blot试剂盒，LipofectAMINE 2000脂质体转染试剂盒(上海碧云天生物公司)；PCR试剂盒(Sigma公司，美国)；酶标仪(上海仪电分析仪器有限公司)；SDS-PAGE 凝胶电泳及转移装置(上海优宁维生物科技股份有限公司)，LAS400凝胶成像系统(GE公司，美国)；ABI 7900PCR扩增仪(上海仪电分析仪器有限公司)。

二、方法

1.癌症基因组图谱数据集：从癌症基因组图谱数据库(TCGA，2020年11月)的门户下载了1 053个胃癌组织和89个正常胃黏膜组织的miRNA数据。

2.细胞培养：用含10% FBS和青、链霉素各100 U/L的RPM11640培养基培养MKN-45，无血清RPM11640培养基培养CSC-G，常规培养于37 ℃，5% CO2培养箱。……