李欣 林明哲 赵久达

胃癌是一种恶性肿瘤。在肿瘤增长的过程中，由于内部血流灌注不足，导致细胞内氧消耗大于供给，从而产生缺氧，形成低氧微环境。细胞对于低氧应激的关键信号通路是低氧诱导因子(hypoxia inducible factor，HIF)信号通路[1-3]。HIF与肿瘤的血管生成、增殖、侵袭及产生耐药性等都具有紧密的联系[4-8]。HIF家族主要由HIF-1、HIF-2和HIF-3构成。HIF家族主要是由α和β亚基组成的异源二聚体，其中调控低氧的的主要功能亚基是α亚基(HIF-1α、HIF-2α、HIF-3α)[9-13]。本文选取HIF-1α代表HIF家族来研究HIF在胃癌病人中的表达以及与预后的相关性。

对象与方法

一、对象

2015年9月～2017年7月在我院治疗的胃癌病人62例，均行胃癌根治术。其中男性36例，女性26例，年龄56～68岁，平均年龄(58.0±5.8)岁，均为开腹手术。由外科医生提供胃癌原发灶组织以及距胃癌原发灶边缘5 cm的癌旁组织。纳入标准：(1)手术之前均未进行过化疗和放疗；(2)肿瘤组织标本均经病理学检查确诊为胃癌。排除标准：其他恶性肿瘤、免疫系统疾病、血液系统疾病、心脑血管疾病病人；严重肝肾功能障碍。

二、方法

1.免疫组织化学染色：采用免疫组织化学染色链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin peroxidase，SP)法检测HIF-1α在胃癌组织及正常胃组织中的表达情况。石蜡切片常规脱水后进行抗原修复，采用H2O2阻断内源性过氧化物酶的活性，封闭非特异性位点；滴加一抗，4 ℃孵育过夜置于室温，磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)冲洗后滴加生物素标记的二抗，37 ℃温箱内孵育35分钟；PBS冲洗后滴加SP复合物，37 ℃温箱内孵育30分钟；PBS冲洗，二甲基联苯胺显色5分钟；……