李 珂，付文君，李红梅，于晶晶，王 浩

低度慢性炎症是2型糠尿病(T2DM)重要的发病机制之一。肠道微生态紊乱在糖尿病、肥胖等代谢性疾病的发生发展中起着关键作用[1]。25羟维生素[D(25(OH)D3]可抑制炎症因子表达，而乳酸菌的补充可通过调节肠道菌群增加循环中25(OH)D3水平[2-3]。膳食纤维菊粉(Inulin,INU)作为一种益生元，通过刺激肠道益生菌的定植，减少炎症反应，具有改善胰岛素抵抗、降低高血糖的作用[4]。本研究通过膳食纤维菊粉干预不同时期T2DM小鼠，观察各组小鼠25(OH)D3变化与肠道菌群、炎症因子的相关性，探讨在不同时期T2DM中肠道菌群与25(OH)D3的相互关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料：从北京大学医学部购买40只4周龄瘦素受体突变雌性小鼠(db/db)为2型糖尿病模型，饲养于宁夏医科大学动物中心。小鼠25(OH)D3ELISA试剂盒购自上海卡迈舒生物科技有限公司。膳食纤维菊粉购自河北省承德市丰宁平安高科实业有限公司。流式细胞仪为美国BD Bioscience公司的FACS Celesta。本研究通过了宁夏医科大学动物伦理委员会批准审核(2016-044)。

1.2 T2DM小鼠模型和给药：在宁夏医科大学动物中心将小鼠禁食不禁水6 h后按2 g/kg体重口服50%葡萄糖注射液，分别于0、30、60、120 min取小鼠尾静脉血测量血糖值。根据以往研究标准[5]，设定空腹血糖<7.0 mmol/L或葡萄糖负荷后2 h血糖≥7.8 mmol/L并<11.1 mmol/L为糖尿病前期组(PDM组，20只)，空腹血糖≥11.1 mmol/L为糖尿病期组(DM组，20只)，再从PDM组和DM组分别随机取出10只作为菊粉干预糖尿病前期组(INU/PDM组)和菊粉干预糖尿病期组(INU/DM组)。菊粉干预组每日每只按5%(wt/wt)连续菊粉灌胃6周；模型对照组每日给予等量的生理盐水灌胃6周。

1.3 外周血浆制备：腹腔注射1%戊巴比妥钠注射液麻醉小鼠。采静脉血离心，取血浆备用。

1.3.1 外周血25(OH)D3浓度测定：制备细胞因子标准稀释液，首先分别在待测样品孔内先后加入样品稀释液和待测样品混匀并温育，洗涤空白孔和待测样品孔；其次，在每孔先后加入显色液A和B以显色，最后在每孔加入终止液终止上述反应。……