刘晓莉，屈玉玲，翟学锋，杨治花

胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，其发生发展涉及多种不同的遗传学改变[1-2]，其中端粒酶逆转录酶(TERT)主要通激活端粒酶的活性来维持端粒的完整性，使真核细胞获得无限增殖能力，在正常细胞内表达量低。全基因组关联研究发现,TERT启动子(TERTp)突变与各种肿瘤中mRNA表达获端粒酶活性的增加有关。TERT在大脑胶质瘤中存在较高表达率，主要归结于TERT启动子区2个体细胞点的突变，即C228T和C250T 2个位点，总体突变率约为55%，导致TERTp的转录活性增加[3-4]。已有研究表明,TERTp突变可以作为原发性胶质母细胞瘤不良的独立预后因子，亦可作为该类型较为特异的诊断标志物。除此之外，在低级别胶质瘤中，TERTp与染色体1p/19q联合缺失密切相关[4]。本研究基于弥漫性胶质瘤的组织病理特征，检测不同级别及亚型胶质瘤石蜡组织中TERTp突变情况，并结合随访资料探讨TERTp状态与不同亚型胶质瘤患者预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料:收集宁夏医科大学总医院神经外科2013年6月-2018年9月手术切除并经病理诊断为弥漫性胶质瘤(WHOⅡ-Ⅳ级)的石蜡标本88例，临床及病理资料情况见表1。

1.2 检测方法

1.2.1 石蜡标本提取基因组DNA:采用QIAGEN 公司DNA 提取试剂盒(69505)，严格按照试剂盒说明书的要求进行操作，并采用紫外分光光度计进行质检提取DNA浓度(10 ng/μl≤浓度≤100 ng/μl)。

1.2.2 TERT启动子区突变检测:①从样本 DNA 液中取出 3 μl加至测序反应液1中，予以42 ℃ 5 min、94 ℃ 5 min、94 ℃ 30 s、58 ℃ 30 s、72 ℃ 60 s(进行20个循环)扩增；② 取出 TERT 测序反应液2,GC PCR MIX3，按照上述步骤及条件进行10个循环进行扩增，再取5 μl PCR扩增产物，加入 2 μl SAP混合物混匀,予以 37 ℃ 60 min、80 ℃ 15 min 进行酶解；……