贾静 吴建 金媛

肺癌已经成为中国癌症死亡的主要原因。其中，80%以上肺癌病例为非小细胞肺癌，与小细胞肺癌比较，非小细胞肺癌细胞的生长和分裂速度更快，对邻近组织的侵袭和远端转移更早[1]。此外，超过50%非小细胞肺癌患者在确诊时已处于肿瘤晚期，其5年生存率低于15%[2-3]。然而，非小细胞肺癌发病机制并不完全清楚。因此，探究非小细胞肺癌发生、转移的分子机制，寻找可靠诊断和治疗靶点是当前亟待解决的重大问题。近年转录组和非编码RNA表达谱研究表明，长链非编码RNA(Long non-coding RNA，lnRNA)以多种方式调控原癌基因或抑癌基因表达，参与包括非小细胞肺癌在内的多种癌症的肿瘤生长、侵袭、转移和耐药过程[4]。不协调同源基因5B反义RNA1(uncoordinated gene 5B antisense RNA1，UNC5B-AS1)在结肠癌和甲状腺癌细胞和临床样本中表达上调，下调其表达可抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭[5-6]。生物信息学分析显示，miR-300是UNC5B-AS1的潜在靶基因，miR-300已被证实在非小细胞肺癌中发挥抑癌基因作用[7]。然而，UNC5B-AS1在非小细胞肺癌中的表达、生物学功能以及UNC5B-AS1能否靶向miR-300参与肺癌进展仍有待证明。本研究以miR-300为切入点，探讨UNC5B-AS1在非小细胞肺癌中的生物学功能和其分子机制，以期为非小细胞肺癌分子治疗提供新的靶点。

资料与方法

一、实验材料

A549细胞购于中国典型培养物保藏中心；杜尔伯科改良伊格尔培养基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium，DMEM)培养液、胎牛血清、Lipofectamine 2000购于美国Invitogen公司；逆转录试剂盒、SYBR Premix Ex Taq购于大连TAKARA生物技术有限公司；UNC5B-AS1小干扰RNA(si-UNC5B-AS1)、无序列阴性对照(si-NC)、miR-300模拟物(miR-300mimics)、mimics阴性对照(miR-NC)、miR-30抑制物(anti-miR-300)、抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、PCR引物、UNC5B-AS1野生型(WT-UNC5B-AS1)或突变型(MUT-UNC5B-AS1)荧光素酶报告基因载体由上海吉玛制药公司提供；……