刘新宇 张倩 孙倩

耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis，MDR-TB)及广泛耐药结核病(extensively drug-resistant tuberculosis，XDR-TB)是我国结核病疫情控制的主要障碍，加剧了对我国公共卫生的威胁。因此，迫切需要改进现有的治疗方案和开发新的抗结核药品。基于有效性与安全性，世界卫生组织于2018年发布了新的MDR-TB治疗指南，将药物重新归为三类[1]。但关于这几种药物在北京市昌平区MDR-TB患者中的耐药特点仍然未知。本研究通过分析A组药品中的左氧氟沙星(levofloxacin，Lfx)、莫西沙星(moxifloxacin，Mfx)、贝达喹啉(bedaquiline，Bdq)和利奈唑胺(linezolid，Lzd)，B组药品中的氯法齐明(clofazimine，Cfz)，以及C组药品中的德拉马尼(delamanid，Dlm)对MDR-TB临床分离株的体外抑菌活性，初步了解北京市昌平区耐多药结核分枝杆菌菌株对这几种药品的敏感性和耐药突变类型，为药品的临床应用提供实验室依据。

材料和方法

一、研究材料

2011—2015年北京市昌平区结核病防治所从收治的结核病患者痰标本中分离培养及菌种鉴定后共获得1099株结核分枝杆菌临床分离株，收集其中耐多药结核分枝杆菌(83株，占7.6%)作为研究资料。结核分枝杆菌标准株H37Rv(ATCC27294)由国家结核病参比实验室提供。

二、研究方法

1. 最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentrations，MIC)药物敏感性(简称“药敏”)检测：对耐多药结核分枝杆菌按照文献[2]的标准进行Lfx、Mfx、Lzd、Bdq、Cfz和Dlm的MIC检测。每种药品的临界浓度见表1[3-5]。

表1 药物最小抑菌浓度范围和临界浓度

2. DNA提取和耐药基因检测：将结核分枝杆菌临床分离株接种于L-J培养基，37 ℃培养4～8周，至有菌落生长后，取一接种环菌于400 μl TE缓冲液(pH 值为8.3)中悬菌，100 ℃煮沸15 min，在8 cm离心半径下以12 000 r/min离心10 min，取上清-20 ℃保存备用[6]。耐药基因用相应的引物进行扩增(表2)。……