刘云青 胡丐锋 徐鸿轩 孟令丙 李金明 刘德平

血清尿酸水平升高可增加局部氧化应激、炎症、胰岛素抵抗和肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活，进而促进结构改变[1]。同时，流行病学研究表明，血清尿酸水平升高与心血管疾病的发生发展密切相关，包括冠心病、心力衰竭和心房颤动等[2-4]。

心肌纤维化是由多种因素引起的胶原纤维过度沉积，胶原浓度和体积分数显著增加，心肌中胶原类型比例失调和排列紊乱[5]。成纤维细胞是分泌细胞外基质蛋白的主要细胞，在心脏损伤修复和心肌纤维化过程中具有显著作用[6]。常驻成纤维细胞的活化和增殖是肌成纤维细胞的重要来源[7-8]。最近研究表明，骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是心肌纤维化中肌成纤维细胞活化的一个关键分子，进而也成为心力衰竭发生发展的一个强有力的驱动因素[9-12]。并且OPN可经凝血酶切割，切割后的OPN促纤维化的效果显著增强[13-14]。

因此，本实验利用不同浓度尿酸刺激原代人心脏成纤维细胞，观察OPN的表达情况，并进一步探索成纤维细胞的增殖、凋亡和胶原分泌变化。

1 材料与方法

1.1 实验材料

原代人心脏成纤维细胞购自美国Science Cell公司；胎牛血清购自Hyclone公司；DMEM培养基购自赛默飞公司；尿酸购自SIGMA公司；FastKing反转录试剂盒[FastKing RT Kit(With gDNase)]购自天根生化科技有限公司；TB Green®荧光染料试剂盒购自TAKARA生物科技有限公司；Trizol细胞裂解液、RIPA细胞裂解液购自北京索莱宝有限公司；蛋白酶抑制剂、10%聚丙烯酰胺凝胶预混液、ECL化学发光试剂购自新赛美公司；……