彭成 王璐 朱正荣 赵文紧 徐元宏

肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumonia，KPN）可引起肺炎、尿路感染、血流感染和肝脓肿等感染性疾病，是医院获得性感染的常见病原菌之一。近年来，耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（Carbapenem-resistantKlebsiella pneumonia，CRKP）的分离率不断上升[1]，患者感染后致死率较高，尤其血流感染CRKP，致死率高达70%[2]。近年有研究发现，决定肺炎克雷伯菌毒力的相关基因和碳青霉烯耐药基因可在菌株间传递，形成高毒力耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌，给临床抗感染治疗带来极大挑战。本研究对血液分离23株CRKP菌株进行毒力基因、碳青霉烯耐药基因检测，应用多位点序列分型方法和脉冲场凝胶电泳技术进行分子分型，现报道如下。

材料与方法

1 菌株来源 收集六安市人民医院2018年1月～2019年12月分离自血培养的非重复CRKP菌株共23株（对厄他培南或亚胺培南耐药菌株）。质控菌株大肠埃希菌ATCC 25922、肺炎克雷伯菌ATCC 1705（KPC阳性对照）系安徽医科大学第一附属医院检验科惠赠。

2 主要设备与试剂 主要仪器包括：VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定药敏仪（法国梅里埃），热循环PCR仪T100、水平电泳仪及凝胶成像仪（美国Bio-Rad）。主要试剂：PCR试剂和Taq酶（日本Takara），亚胺培南纸片（10 μg）、厄他培南纸片（10 μg）（英国Oxoid），哥伦比亚血琼脂平板（上海科玛嘉），Muller-Hinton 琼脂平板（郑州安图），革兰阴性菌鉴定卡及药敏卡（法国梅里埃），所有引物均由上海生工公司合成。

3 菌株鉴定和药敏试验 使用细菌鉴定仪及配套的鉴定、药敏卡对血培养阳性转种在哥伦比亚血琼脂平板上的细菌进行鉴定及药敏试验，采用纸片扩散法复核厄他培南及亚胺培南的抑菌圈直径，根据美国临床实验室标准化研究所标准操作规程（CLSI-M100-29）进行试验操作及折点判断。……