刘婷婷 宋巧凤 王希柱 闫玉敏 刘小雪

冠状动脉旁路移植术等血管再通术治疗缺血性心脏病时易造成心肌缺氧/复氧(H/R)损伤。心肌细胞氧化应激、凋亡等可加重H/R损伤[1-4]。氯吡格雷属于抑制血小板聚集的噻吡啶类衍生物，可用于缺血性疾病的治疗[5]，但对心肌H/R损伤的治疗效果及可能机制尚不明确。长链非编码RNA-4231(lncRNA-4231)表达上调可保护心肌细胞[6]。本研究建立心肌细胞H/R损伤模型，探讨氯吡格雷对H/R诱导心肌细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响及其对lncRNA-4231的调控作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

氯吡格雷购自乐普药业股份有限公司；大鼠H9c2心肌细胞购自美国ATCC公司；DMEM、胎牛血清购自美国Gibco公司；甲基噻唑基四唑(MTT)、Annexin V-FITC/PI购自美国Sigma公司；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；Trizol试剂购自北京全式金生物技术有限公司；反转录与荧光定量检测试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；pcDNA3.1购自上海索宝生物科技有限公司。

1.2 实验分组

取对数生长期H9c2心肌细胞接种于96孔板(5×103/孔)，分别加入不同浓度(H/R组0、低剂量药物组12.5 μg/mL、中剂量药物组25 μg/mL、高剂量药物组50 μg/mL)的氯吡格雷处理24 h，将H9c2细胞置于缺氧装置(95%N2、5%CO2)中处理24 h，转移至正常培养箱(95%O2、5%CO2)内复氧处理6 h，进行H/R处理[7]。将正常培养的H9c2细胞作为对照组。

分别将pcDNA、pcDNA-lncRNA-4231转染至H9c2心肌细胞，随后进行上述H/R处理，分别记作pcDNA组、pcDNA-lncRNA-4231组。

1.3 MTT检测细胞增殖

收集各组心肌细胞接种于96孔板(1×104个/孔)，每孔加入MTT溶液20 μL，继续培养4 h，弃上清，每孔加入150 μL DMSO，孵育5 min，检测各孔吸光度值(OD值)。……