阿燕·西合斯 罗健 邵明明 张玉玺 张源明 王凌鹏

淋巴细胞连接蛋白(LNK)是人类高血压的关键驱动因素[1]。该蛋白上有多个酪氨酸磷酸化位点，可作为受体被磷酸化，在不同细胞信号通路如Janus激酶(JAK)/信号转导与转录激活子(STAT)信号通路中发挥作用[2]。研究发现，JAK-STAT信号通路激活能够调节血管内皮生长因子、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的局部合成，参与高血压的发生发展[3-4]。本研究前期预实验表明，高血压患者体内LNK与炎性细胞因子的表达存在相关性，LNK可能通过负性调控炎性细胞因子分泌，参与高血压的发生发展。本研究建立高血压血管平滑肌细胞模型，进一步探讨LNK介导的JAK/STAT信号通路在高血压血管重构中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料和试剂

1.2 细胞培养

大鼠胸主动脉平滑肌细胞购自凯基生物。血管平滑肌细胞(VSMC)培养采用含10%胎牛血清的高糖DMEM完全培养基，于37 ℃、饱和湿度、5%CO2细胞培养箱中进行培养，0.25%胰酶消化后进行传代。培养瓶中细胞贴壁融合达90%时，加入10 μmol/L AngⅡ，继续干预24 h，构建高血压细胞模型。

1.3 pIRES2-LNK过表达质粒构建及细胞转染

1.4 实验分组及干预

将VSMC分为4组：对照组，正常培养VSMC 72 h；AngⅡ组，正常培养VSMC 48 h后，加入AngⅡ干预24 h；AngⅡ+空载组，转染pIRES2-EGFP空载质粒72 h，转染结束前24 h加入AngⅡ干预VSMC细胞24 h；AngⅡ+LNK组，转染pIRES2-EGFP-SH2B3重组载体72 h，转染结束前24 h加入AngⅡ干预VSMC 24 h。

1.5 CCK-8法检测细胞增殖水平

取VSMC，制备成5×104/mL单细胞悬液，接种至96孔板中，100 μL/孔，细胞贴壁后，弃去培养基，按照1.4进行实验分组并干预。干预完成后，弃去培养基，每孔加入100 μL 10%CCK-8溶液，37 ℃孵育1 h后酶标仪测定450 nm处的吸光值，即为所需记录的光密度(OD)值。……