薛丽，王刚，王常利

(1.空军986医院检验病理科；2.解放军987医院检验科，陕西 西安 710000)

鳞状细胞癌是宫颈癌最常见的组织学类型[1]。近年宫颈癌及癌前病变的早期诊断和治疗已得到显著提高，但浸润、转移和分化不良仍是宫颈癌患者术后复发和死亡的重要原因[2-3]。Ki-67是一种与细胞增殖相关的蛋白质，能反映肿瘤细胞的增殖能力[4]。MMP9是MMP家族的重要成员之一，与多种肿瘤转移密切相关[5]。本研究拟对宫颈鳞癌组织中Ki-67和MMP9蛋白的表达进行分析，并探讨其与患者临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2015年1月至2020年6月在空军986医院病理科存档并经两名病理专家确诊的100份宫颈鳞癌组织标本和60份经病理检查证实为正常宫颈组织的癌旁标本。所有病例均有完整的临床病理资料。根据FIGO分期标准，Ib-IIa期33例，IIb期46例，III期21例，低分化39例，中高分化61例，淋巴结转移66例。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学法检测Ki-67和MMP9蛋白表达 所有组织标本均采用多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片厚度2 μm，。染色步骤如下：组织切片用梯度二甲苯和乙醇脱蜡脱水，放入100 ℃柠檬酸盐缓冲液加热20 min，待抗原冷却至室温后用3%过氧化氢封闭8 min，然后按照SP组织化学试剂盒(北京中山金桥生物科技有限公司)说明书进行操作，5%正常血清室温孵育15 min，弃去血清，勿洗，加一抗4℃孵育过夜(Ki-67稀释比例1∶100，MMP9稀释比例1∶50，抗体购自美国Cell Signaling Technology公司)，次日使用磷酸盐缓冲溶液冲洗3次，加入生物素标记的二抗，37℃孵育60 min，再经磷酸盐缓冲溶液冲洗3次，分别用二氨基联苯胺和苏木精染色，最后，经梯度二甲苯和乙醇水合透明后用树脂封闭切片，于显微镜下观察染色结果。……