肖梓颖 王一帆 梁雪茹 黄郁葱

摘要 [目的] 獲得卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）HSP30基因并探讨其组织表达。 [方法]采用RACE的方法从卵形鲳鲹脾组织克隆HSP30基因的cDNA 全序列，并用荧光定量PCR分析在健康鱼及哈维氏弧菌感染后HSP30基因的组织表达。[结果]HSP30基因cDNA序列全长913 bp，包含5′非编码区（5′UTR）89 bp、3′非编码区（3′UTR）188 bp，开放阅读框（ORF）636 bp，编码211个氨基酸。预测其氨基酸序列成熟肽的蛋白分子质量为24.1 kD，理论等电点为5.62。HSP30包括N-末端序列（NTS）、α-晶状体蛋白结构域（ACD）、C-末端序列（CTS）和C-末端延伸（CTE）。系统进化分析结果显示卵形鲳鲹HSP30与高体鰤（Seriola dumerili）HSP30聚为一支。卵形鲳鲹HSP30基因在各组织中均有不同程度的表达，其中肝组织中表达量最高，其次为皮肤、肌肉、脾、心、肾，其他组织的表达量较低。哈维弧菌侵染卵形鲳鲹后，肝、脾和肾组织中HSP30基因mRNA 表达量均升高，肝组织中变化最显著。[结论]成功克隆了卵形鲳鲹HSP30基因，为进一步揭示卵形鲳鲹HSP30的抗菌免疫应答机制提供了理论依据。

关键词 卵形鲳鲹;热休克蛋白;HSP30;基因克隆;组织表达

中图分类号 S917.4文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2021）02-0081-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.02.024

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Cloning and Tissue Expression of HSP30 Gene from Trachinotus ovatus

XIAO Ziying，WANG Yifan，LIANG Xueru et al （Fisheries College of Guangdong Ocean University/Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals of Guangdong&Key Laboratory of Control for Diseases of Aquatic Economic Animals of Guangdong Higher Education Institute，Zhanjiang，Guangdong 524088）

Abstract [Objective]To obtain the HSP30 gene of Trachinotus ovatus and to study its tissue expression.[Method]The full length cDNA sequence of the HSP30 gene was cloned by rapid amplification of cDNA ends （RACE） from the spleen of T.ovatus，and its expression profiles in tissues of the health fish and the fish infected with Vbirio harveyi were also analyzed by quantitative real time PCR （qRTPCR）.[Result]The total cDNA sequence of T.ovatus HSP30 was 913 bp，including 5′ UTR of 89 bp，3′UTR of 188 bp，and an open reading frame （ORF） of 636 bp encoding 211 amino acids with molecule mass of 24.1 kD and PI of 5.62.The predicted HSP30 protein included an Nterminal sequence （NTS），an αcrystallin domain （ACD），a Cterminal sequence （CTS） and a Cterminal extension （CTE） in structure.Phylogenetic analysis showed that T.ovatus was clustered closely with Seriola dumerili.The qRTPCR analysis showed that T.ovatus HSP30 gene expressed in all examined tissues with the highest levels in liver，moderate levels in skin，muscle，spleen，heart，kidney，low levels in other tissues.The mRNA expression levels of HSP30 were significantly upregulated in the liver，spleen and kidney issues，especially in the liver.[Conclusion]The HSP30 gene of T.ovatus was successfully cloned，which will provide a theoretical basis for further elucidating the mechanism of antibacterial immune response of T.ovatus HSP30.

Key words Trachinotus ovatus;Heat shock protein;HSP30;Gene cloning;Tissue expression

热休克蛋白（heat shock proteins，HSPs） 是一类结构高度保守的应激反应伴侣蛋白，可响应各种应激而合成，参与各种细胞过程，如蛋白质折叠、蛋白质运输以及蛋白质复合物组装/拆卸和降解，维持细胞的稳态[1]。很多研究都表明HSP还参与炎症、免疫、细胞分化、抗氧化、抗辐射以及抗癌细胞增殖等生物学功能[2-3]。根据HSP分子、结构和功能，分为6个家族，包括小分子HSP（sHSP）、HSP40、HSP60、HSP70、HSP90和大分子HSP[2]。 HSP分子量大小为10～110 kD。此外，它们的特定部位和生理作用会根据其大小在细胞内发生变化。……