吴蕊辛，郑薇，李宁，芮忠颖，周雅倩，王萱

天津医科大学总医院，天津 300052

Graves病是自身免疫性甲状腺病最常见的类型［1］。Graves眼病（GO）是Graves病最常见的甲状腺外表现［2］，通常累及眼球后脂肪、眼外肌等，从而造成眼部炎症、组织肿胀和纤维变性。目前研究认为，促甲状腺素受体抗体（TRAb）在Graves病及GO的发病过程中起重要作用。近年有研究报道，GO患者眼眶成纤维细胞中胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）高表达，IGF-1R是GO的致病抗原之一［3-4］。胰岛素样生长因子1（IGF-1）通过与IGF-1R结合刺激GO患者眼眶成纤维细胞分泌透明质酸，与增多的脂肪细胞共同参与GO的发生发展，IGF-1R是GO患者眼眶成纤维细胞增殖的重要始动因素［5-6］。本课题组前期通过转染促甲状腺激素受体（TSHR）α亚单位重组质粒成功诱导出Graves病小鼠模型［7-8］，鉴于IGF-1R在GO发病过程中的重要作用，本研究拟构建IGF-1R重组真核表达质粒，为诱导Graves病伴GO动物模型奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 TRIzol试剂购自美国Gibco公司，RTPCR试剂盒购自日本TaKaRa公司，限制性内切酶BamHⅠ、ScaⅠ、HindⅢ购自美国NEB公司，质粒提取试剂盒、DNA Marker、DNA纯化试剂盒购自北京天为时代科技有限公司，E.coli TOP10和pcDNA™3.1D/V5-His-TOPO购自美国Invitrogen公司，上下游引物合成及DNA测序由上海生工生物技术公司完成。

1.2 方法

1.2.1 引物设计 根据美国国立生物技术信息中心（NCBI）公布的人IGF-1R基因编码序列（NM_000875.5）和pcDNA™3.1D/V5-His-TOPO质粒载体信息，设计扩增IGF-1Rα亚单位引物，并在上游引物5'-端增加CACC拓扑克隆位点，保证克隆方向正确性和提高克隆效率。上游引物序列：5'-CACCATGAAGTCTGGCTCCG-3'，下游引物序列：5'-TAGCTTGGCCCCTCCATACT-3'，扩增产物长度2 679 bp。

1.2.2 甲状腺组织总RNA提取 收集来自天津医科大学总医院甲状腺外科Graves病患者手术切除的新鲜甲状腺组织，采用TRIzol一步法提取总RNA。……