李晓未，陈 志，王兴东，朱雪明

（1.苏州大学附属儿童医院病理科，江苏 苏州 215025；2.苏州大学附属第一医院病理科，江苏 苏州 215006）

肾脏疾病主要由肾小球和肾小管结构及功能上的病变引起，发病率逐年增高。随着医疗水平的进步，肾穿刺活检越来越广泛地应用于临床[1]。肾穿刺活检损伤小，获取的组织新鲜，不仅适用于常规病理检查，更适合免疫荧光病理及电子显微镜检查[2]。HE组织形态、特殊染色、免疫荧光加电镜观察能够更准确、更迅速地明确诊断和分类，为临床治疗、判断预后提供重要依据。现根据我科多年的肾穿刺免疫荧光实践操作经验，对该方法提出几点改进和体会，介绍如下。

1 材料与方法

1.1 临床标本 所有标本均来自2019年我院肾内科行肾穿刺活检的病理标本，新鲜的肾穿刺标本用生理盐水浸湿的纱布包裹，密闭容器盛装，贴好标签，冰盒中送检至病理科。

1.2 材料 恒冷切片机（Leica）、荧光显微镜（LeicaNikon）、湿盒、光学显微镜（OLYMPUS）、37 ℃水浴恒温箱。

1.3 试剂 荧光抗体（IgG、IgM、IgA、C1q、C3、Fibrinogen）、及Wieslab®Alport's Syndrome Kit（检测Ⅳ型胶原α3链、α5链）、0.01 mol/L pH7.14 PBS、缓冲甘油等。

1.4 冰冻切片 ①先将OCT包埋剂均匀涂抹于冻头上，放置冰冻切片机内使其冷却凝固。②修去表面的包埋剂使其表面平整，用组织镊将肾穿刺组织水平放置在冻头上，务必使其在同一水平面。③在组织周围再加少许包埋剂，放入冰冻切片机，待其凝固。④固定好冻头，缓慢细修，使组织充分暴露出来，正式切片3 张，厚度5 μm，每张切片放3 块组织，注意中间留有一定间距。

1.5 免疫荧光染色经典方法

1.5.1 IgG、IgM、IgA、C1q、C3、Fibrinogen荧光标记：①每个指标切1 张冰冻切片，室温干燥后，丙酮固定10 min，PBS洗3 次。……