高飞 武志鹏 阮一华

1安阳市人民医院眼科 455001；2郑州大学第一附属医院眼科 450052

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病严重的并发症，是糖尿病患者视力损害和盲的主要原因[1]。DR的发病机制是一个多因素相互作用的过程，其中糖尿病患者血液成分改变所引起的视网膜血管内皮细胞过度凋亡起着一定的作用[2]。目前研究已发现DR与高葡萄糖水平诱导的视网膜微血管损伤有关[3]。视网膜血管内皮细胞能够维持血-视网膜屏障的稳定性，在保护视网膜结构的完整性和良好的视觉功能方面发挥着重要作用。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类具有调节功能的非编码RNA，其可通过调控靶基因或信号通路参与生物发育、细胞增生和凋亡等生理过程[4-5]。miR-146a已被证实参与糖尿病肾病、糖尿病眼病、糖尿病性心脏病等多种糖尿病并发症的发生[6-7]。且已有研究显示，DR患者血清中miR-146a的表达明显降低，提示miR-146a可能参与DR的发生和发展[8]，但其具体作用机制尚未完全明确。本研究探讨miR-146a对高糖诱导视网膜血管内皮细胞凋亡的调控作用及其分子机制，以期为DR的发病机制以及治疗方法研究提供线索。

1 材料与方法

1.1 材料

人视网膜微血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells，HRMECs)及其专用细胞培养基(endothelial cell medium，ECM)(美国Sciencell公司)；胎牛血清、D-葡萄糖、Trizol试剂、逆转录试剂盒(美国Gibco公司)；Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司)；miR-146a mimics及对应阴性对照mimics control(上海吉玛制药技术有限公司)；SYBR premix Ex Taq试剂盒(大连宝生物工程有限公司)；噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide，MTT)(美国Sigma公司)；Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡检测试剂盒(日本Takara公司)；细胞裂解液RIPA、BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天技术研究所)；……