魏明慧，孙浩荣，王静文，薛明明＊

（内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010059）

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是心脏病、外周血管病、脑血管病等疾病的重要发病机制[1]。AS的发病率居高不下，是世界上最重要的公共卫生问题之一。中国AS的发病率也急剧上升[2]。研究表明炎症反应参与AS发病的各个阶段，在初期表现为急性渗出性炎症，在晚期以慢性增生性炎症为特征[3]。因此，抑制炎症可能成为治疗AS的有效方法。研究报道[4]氧化型低密度脂蛋白（oxidized lowdensity lipoprotein，ox-LDL）与AS、高血压、冠状动脉及外周动脉疾病、急性冠脉综合征等心血管疾病密切相关，是AS的独立危险因素。沉默信息调节因子（silent information regulator，Sirt）1作为SIRT蛋白家族中最具代表性的因子，具有脱乙酰酶活性，可修饰脂质，促进自噬，减轻炎症，改善血管内皮细胞功能[5]。本文利用人冠状动脉内皮细胞（human coronary endothelial cells，HCAEC）建立ox-LDL诱导的AS细胞模型，探讨Sirt1对HCAEC炎症反应的影响。以期为AS的治疗提供新的药物靶点和理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

HCAEC、ECM内皮细胞培养基购自美国Sciencell公司；ox-LDL购自上海翊圣生物科技有限公司；GV146-SIRT1过表达质粒（货号：POSE146071634）、GV102-SIRT1干扰质粒（货号：PIEE102071634）购自上海吉凯基因有限公司；总RNA提取试剂盒购自北京TIANGEN生化科技有限公司（货号：RP120227），Lipofectamine™2000 Transfection Reagent（货号：11668019）购自Thermo Fisher科技（中国）有限公司，Anti-GAPDH抗体-Loading Control（货号：ab9485）、重组Anti-SIRT1抗体[EPR18239]（货号：ab189494）、重组Anti-ICAM1抗体[EP1442Y]（货号：ab53013）均购自Abcam上海有限责任公司；Dylight800，Goat Anti-Rabbit IgG（货号：A23920）购自Abbkine公司；人hs-CRP ELISA试剂盒、人IL-1 ELISA试剂盒购自深圳达科为生物工程有限公司；TransStart Tip Green qPCR SuperMix、PrimeScript RT Master Mix、RNAiso Plus购自宝生物工程（大连）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养将HCAEC中加入含10%FBS的ECM培养基并置于37℃，5%CO2培养箱内，每隔24h采用半数换液原则弃掉一半培养基再加入一半新的含10%FBS的ECM培养基，当细胞融合度约为85%~90%并处于对数生长期时，以1：2的比例进行传代培养。……