李珂 李京 贺西京 王爽 郝丹丹

骨肉瘤是一种最常见的恶性骨肿瘤，在儿童和青少年人群发病率最高。转移是骨肉瘤预后不良的关键因素之一，最常见的转移部位为肺，约有15%～25%的骨肉瘤病人在确诊时即发现肺转移［1_3］。骨肉瘤目前的治疗方式为保肢手术联合辅助化疗，然而转移病人的5年生存率仍然不足20%［4_5］。有文献报道，Notch信号通路在包括骨肉瘤在内的多种恶性肿瘤中均有异常表达，增加肿瘤的迁移侵袭能力［6_8］。而DAPT是一种γ-分泌酶抑制剂，能够在Notch通路的活化过程中起到阻断作用［9］。本文通过体外培养人骨肉瘤细胞系MG63和143B以及构建体内肺转移瘤模型，并用DAPT进行处理干预，来探究DAPT能否通过阻断Notch通路而抑制骨肉瘤细胞的迁移及体内侵袭能力，从而为骨肉瘤的临床抗转移治疗提供研究思路。

材料与方法

一、细胞株和主要试剂耗材

人骨肉瘤细胞系MG63和143B（中国科学院上海细胞研究所，中国）；DMEM高糖培养基、胎牛血清、青霉素&链霉素（Gibco公司，美国）；PBS缓冲液、胰蛋白酶（Hyclone公司，美国）；DAPT、二甲基亚砜（DMSO）、4%多聚甲醛（Sigma公司，美国）；Jagged1活性肽（序列：CDYYYGFGCNKFCRPR，10μM，Gen_Script）；Transwell小室（Corning Costar公司，美国）；鼠抗人Notch1（免疫荧光1∶250，Abcam公司，英国）；羊抗鼠二抗（免疫荧光1∶500，Abcam公司，英国）；DAPI（1∶1 000，Abcam公司，英国）。

二、实验方法

（一）细胞培养

143B和MG63细胞系培养于含10%胎牛血清和1%青链霉素的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的细胞培养箱，每两天换液一次，将细胞培养至对数生长期，用胰蛋白酶消化收集用于后续实验。

（二）DAPT处理

将DAPT用DMSO溶解配成50 mM的母液，分装后储存于-80℃冰箱中。使用时取出溶解，用DMEM培养基稀释到实验所需浓度。……