李瑞晓，唐启胜，马善金，张 波，李雪莲，张志明

1.空军军医大学唐都医院泌尿外科，陕西 西安 710038；2.西安市中医医院外科，陕西 西安 710002

目前，晚期膀胱癌的治疗主要是基于顺铂（cisplatin，CDDP）的辅助治疗，在根治性膀胱切除术前/后或晚期辅以CDDP为主的化疗是目前的主要治疗手段［1］。然而，由于对化疗药物的耐药性产生，CDDP的疗效有限，化疗有效率约为50%。Bcl-2在与抗癌药物（如CDDP）诱导的DNA损伤相关的细胞凋亡中起关键作用，Bcl-2的过表达赋予了细胞多药耐药性，并且临床数据已将Bcl-2表达水平与CDDP耐药和复发性疾病联系起来［2］。N-Myc下游调节基因2（N-Myc down stream-regulated gene 2，NDRG2）是一种新发现的p53诱导基因，被认为参与DNA损伤诱导的p53相关凋亡途径并在抑制增殖中发挥作用。我们的前期研究发现，NDRG2基因的过表达可在体内/外抑制膀胱肿瘤的增殖及侵袭能力［11］。鉴于先前的研究，关于NDRG2基因在膀胱癌耐药机制的研究比较少，因此本研究旨在探讨NDRG2是否通过与Bcl-2相互作用而影响膀胱癌细胞耐药的形成，为临床治疗晚期膀胱癌提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 细胞培养

人膀胱癌细胞系T24购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，并在含有10%胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）的DMEM中于37 ℃、CO2体积分数为5%的温箱中培养。为了培育出抗CDDP的亚型，将T24细胞于含有CDDP（浓度递增：0.1～1.0 μg/mL）的培养基中连续传代，持续6个月。最终将CDDP抗性细胞株于含有1 μg/mL CDDP的培养基中培养。

1.2 基因修饰和转染

将编码全长NDRG2的cDNA亚克隆到pcDNA3.1载体（美国Invitrogen公司）中，通过转染构建NDRG2基因过表达T24细胞株，同时采用小干扰RNA（siRNA）技术构建NDRG2及Bcl-2基因沉默细胞株。……