丛倩倩 孔 怡 安秀荣

（泰安市农业科学研究院，山东泰安 271000）

传统的食用菌分类和鉴定方法主要是基于子实体的形态特征和微观结构。但是这种分类和鉴定方法在鉴定一些较为相似的种时会比较困难，甚至会出现一些错误，同时也阻碍了科学研究的进程和食用菌的进一步开发利用[1]。

笔者在进行灵芝产业调研时，发现了一株袋栽食用菌，其子实体无明显菌柄，菌盖乳白色、扇形，近基部有不明显的瘤状突起，当地称之为“白灵芝”。为了明确该“白灵芝”的种属，采取分子生物学结合形态学方法，对其分类地位进行初步鉴定，以便为其进一步的开发利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料

样品采自于山东省聊城市冠县芝艺缘灵芝专业合作社，为大棚墙式立体栽培的子实体。

1.2 试验方法

1.2.1 子实体的形态鉴定

肉眼观察该菌株的子实体形态，分别用解剖镜、显微镜观察菌管的形状和孢子的形态，然后参照卯晓岚［2］的方法初步分类鉴定。

1.2.2 ITS分子鉴定

子实体组织分离培养长出菌丝后，挑取尖端菌丝置空白PDA培养基上继续培养。重复以上操作3次后即可得到纯培养物（菌丝），保存于4℃冰箱备用。

首先用真菌DNA提取试剂盒（天根生化科技有限公司）提取菌丝DNA，然后用真菌通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增，PCR反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，55℃退火45 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃后延伸10 min。在凝胶成像系统中观察经琼脂糖凝胶电泳后的PCR产物，选择600~700 bp的条带进行切胶回收，回收产物送上海生工生物工程有限公司测序，测序结果输入Gen⁃Bank数据库进行BLAST比对分析，查找与其同源性最高的序列。……