周正炜，郭派派，王曼曼，孙寒飞，王 珍，邰 宇，刘 琪，张巧琳，吴华勋，汪庆童，魏 伟

多种疾病可引起唾液腺功能减退，典型代表为干燥综合征(Sjogren′s syndrome, SS)，目前尚无有效的治疗药物。已有研究表明，唾液腺中的成纤维细胞异常活化，产生大量胶原，引起唾液腺发生纤维化是SS患者唾液腺功能损伤，唾液分泌量减少的重要病理机制。因此对唾液腺成纤维细胞功能异常的发生机制、细胞功能改善方法的研究有助于深入理解SS病理机制和寻找有效的治疗手段。实验动物原代唾液腺成纤维细胞的分离培养将为上述研究提供实验保障。然而目前尚没有成熟的原代唾液腺成纤维细胞的分离培养方法，使相关细胞学研究的开展颇为困难。该课题组通过胰酶消化法成功的从新生大鼠颌下腺中分离得到形态良好、纯度较高的成纤维细胞，并摸索出适合的培养条件，为进一步从细胞分子水平开展SS研究提供实验手段。

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级新生48 h内的SD乳鼠4只，体质量5～6 g，雌雄不限，由安徽医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK(皖)2017-001。本实验方案已通过安徽医科大学临床药理研究所动物伦理委员会批准。

1.2 主要实验试剂及仪器

DMEM/F12 1 ∶1培养基、DPBS购自美国HyClone公司；青霉素-链霉素溶液(×100)、0.25%胰蛋白酶(含EDTA)、DAPI染色液、抗荧光猝灭封片液购自上海Beyotime公司；胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)购自以色列Biological Industries公司；明胶购自北京Solarbio公司；兔抗波形蛋白多克隆抗体、鼠抗GAPDH单克隆抗体、CoreLite488标记的羊抗兔二抗购自美国Proteintech公司；羊抗鼠二抗和羊抗兔二抗购自美国Jackson Immuno Research公司；……