郭圣超，武雪亮，薛 军，韩 磊，孙光源，杨东东，屈 明

葡萄糖转运蛋白在向代谢活性细胞提供能量的过程中发挥着关键作用，葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1，

Glut

1)在真核生物和原核生物中均有发现，其表达升高或激活已被证明是诸多恶性肿瘤发生的主要原因。转化生长因子(transforming growth factor，TGF)-β是与肿瘤发生、进展和转移调控密切相关的分泌型配体。TGF-β信号通路在控制细胞增殖和结肠直肠癌的分化中具有重要作用。现已证实磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶标(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PI3K-AKTmTOR)信号通路与细胞凋亡、增殖、血管生成和转移密切相关，也是导致结直肠癌变的重要机制。因此，该研究旨在探讨

Glut

1基因沉默介导的TGF-β/PI3K-AKT-mTOR信号通路对结肠直肠癌细胞的作用，为结直肠癌的靶向诊疗提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 材料与主要试剂

人结肠癌细胞株HT-29细胞(上海生物工程研究所);10%胎牛血清RPMI 1640、DMEM(美国Gibco公司);siRNA干扰序列(上海生工生物工程技术服务有限公司),载体pSIREN(北京华奥正生科技有限公司),Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司),DAPI(上海碧云天生物技术有限公司),TRIzol试剂 (美国Invitrogen公司),PrimeScriptTM RT reagent Kit (北京智杰方远科技有限公司),引物(北京擎科新业生物技术有限公司),BCA检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司),酶抑制剂(北京嘉美纽诺生物科技有限公司),MTT溶液(美国Sigma-aldrich公司)、PI染液(上海前尘生物科技有限公司)。

1.2 细胞培养

将H-29细胞培养于含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中，以1×10个/孔的密度将细胞分种于6孔培养板，并置于37 ℃、5% CO及饱和湿度的孵箱中培养。

1.3 构建质粒

siRNA序列设计根据……