张建育 李毅宁 郭一泓 穆 鑫 福建医科大学附属第二医院泌尿外科泉州362000

前列腺癌是临床常见恶性肿瘤之一,其发病率逐年升高,但前列腺癌发生及转移的分子机制尚未阐明[1]。长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)在多种肿瘤中异常表达并可影响肿瘤细胞增殖、分化等过程[2]。研究表明LncRNA表达异常与前列腺癌发生及发展密切相关[3]。但关于其具体作用机制尚未阐明。长链非编码RNA(LncRNA LINC00355)在肿瘤中呈高表达并可促进肿瘤进展[4]。微小RNA-494-3p(microRNA-494-3p,miR-494-3p)在髓母细胞瘤中呈低表达,上调其表达可抑制肿瘤进展[5]。细胞周期蛋白HD2(cyclin-D2,CCND2)在卵巢癌中表达量升高,下调其表达可抑制肿瘤细胞迁移及侵袭[6]。生物学信息学分析显示LINC00355与miR-494-3p存在结合位点,miR-494-3p与CCND2存在结合位点,但LINC00355是否可通过调控miR-494-3p/CCND2参与前列腺癌发生及发展过程尚未可知。本研究主要探讨前列腺癌组织中LINC00355、miR-494-3p、CCND2的表达,探究LINC00355对前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响,分析其对miR-494-3p、CCND2的调控作用,旨在为揭示前列腺癌发生及转移的分子机制奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验试剂 前列腺癌细胞DU145购自美国ATCC细胞库；杜氏改良培养基(DMEM)、胎牛血清、胰蛋白酶购自美国Gibco公司；Lipofectamine2000与TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司；反转录与qRT-PCR试剂盒购自美国Thermo Fisher公司；LINC00355小干扰RNA(si-LINC00355)(序列:ACGAUCUAUCGAUCGUAG)、乱序无意义阴性对照(si-NC)、miR-494-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-494-3p)(序列:GUUUGUUUUCACUAGUCUAGC)及其阴性对照(anti-miR-NC)、miR-494-3p寡核苷酸模拟物(miR-494-3p mimics)(序列:AGUCGAUCUACGUAGCUAGUCG)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)购自广州锐博生物科技有限公司；pcDNA3.1购自上海远慕生物科技有限公司；甲基噻唑基四唑(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)、二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)细胞凋亡试剂盒购自美国Sigma公司；……