黄慧敏 杨 勇 魏 英 王靳琎 陈琴华 湖北医药学院附属东风医院实验中心十堰442008

女性乳腺癌发病率占全球女性恶性肿瘤的30%,死亡率占女性恶性肿瘤的15%,且发病率呈逐年上升趋势[1]。因此,进一步研究乳腺癌的有效治疗方法具有重要的意义。近年来,脂质代谢紊乱作为乳腺癌的危险因素,受到国内外学者的关注。硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoylcoenzyme A desaturase 1,SCD1)是脂肪酸从头合成的关键酶,广泛参与脂肪代谢,进而影响细胞膜结构及信号传导等生物学功能,与细胞增殖、凋亡及炎症反应等关系密切[2-3]。研究显示SCD1的表达与乳腺癌的发生、发展及预后呈负相关[4-7]。本研究拟通过小干扰RNA(small interfreing RNA,siRNA)干扰技术阻断乳腺癌MCF-7细胞中SCD1表达,通过MTT增殖实验、Annexin V-FITC/PI染色、ELISA等实验,检测SCD1基因沉默后对MCF-7细胞增殖、凋亡及脂质代谢的影响,以期为深入研究SCD1基因在乳腺癌MCF-7细胞中的作用及靶向治疗药物开发提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 人乳腺癌MCF-7细胞购自中国科学院细胞库；TRIzol Reagent购自美国Omega公司；反转录试剂盒购自美国Fermentas公司；PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司；RIPA裂解液购自上海碧云天生物技术有限公司；PVDF膜购自美国Millipore公司；SCD1抗体购自美国Abcam公司；荧光二抗购自优宁维公司；Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司；Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒购自美国Sigma公司；MTT购自南京凯基生物有限公司；胆固醇及三酰甘油试剂盒购自北京普利莱基因技术有限公司；全蛋白提取试剂盒购自南京凯基生物有限公司；BCA蛋白浓度检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；DMEM培养基购自美国Gibco公司；……