雒 猛，王 忠，高 峰，王 凯，赵清刚

山东省脐带血造血干细胞库，山东济南 250102

脐带血干细胞的应用，已从当初的移植治疗血液病逐步向治疗多种疾病方向发展，脐带血来源的干细胞对治疗早产儿脑损伤和神经后遗症、失代偿期酒精性肝硬化、自身免疫性疾病、黏多糖病和1型糖尿病等均有很好的疗效[1-8]。脐带血自采集到应用有相当一段时间的间隔，把获得的干细胞储存于液氮中，是目前通用的方式。干细胞在液氮中可以保存几个月至十多年仍有很高的细胞活性[9-13]。本研究对-196 ℃储存的20年脐带血200份进行检测，并进行质量分析。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 设备：流式细胞仪(美国BD calibur)、全自动血液分析仪(日本希森美康XN-350)、液氮罐(美国THERMO)、二氧化碳培养箱(美国THERMO)、BacT/ALERT 3D 240全自动血液培养系统(法国梅里埃)、全自动酶免分析仪(奥斯邦STAR+FAME)。试剂：美国BD公司生产的CD34、CD45、mouse IgG、甲基纤维素(加拿大Stemcell)、台盼蓝(德国Sigma)、培养瓶 BacT/ALERT的需氧瓶和厌氧瓶(法国梅里埃)。

1.2标本处理 选取2000年储存已满20年的血液200例，入库前传染病等各项检测指标符合入库标准，标本一直冻存于液氮中。从液氮罐中取出标本，在37 ℃水浴中迅速2 min内复融，标本进行后续检测。

1.3传染病检测 -20 ℃保存标本，取出当时保留的母血、脐带血复检标本，采用酶联免疫吸附试验，采用全自动酶免分析系统分别检测母血、脐带血血浆的乙肝表面抗原(HBsAg)、丙肝病毒抗体(抗-HCV)、梅毒螺旋体抗体(抗-TP)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)(1+2)和巨细胞病毒(CMV)-IgM抗体。

1.4有核细胞数(TNC) 复苏后的脐带血标本采用全自动血液分析仪获取TNC。……