刘孟洁，谷长平，王月兰

急性肺损伤（acute lung injury，ALI）、急性呼吸窘迫综合征 （acute respiratory distress syndrome，ARDS） 是由各种非心源性原因导致的肺毛细血管内皮和肺泡上皮细胞损伤，血管通透性增高的临床综合征，表现为急性、进行性加重的呼吸困难，难治性低氧血症和肺水肿［1］。 ALI 和ARDS 是一个动态变化的复杂的临床综合征，是严重损伤引起机体全身免疫炎症反应失控过程中的不同阶段。

机械通气诱发肺损伤（ventilation induced lung injury，VILI） 的基本机制为肺组织过度牵拉的机械因素和机械力学诱导的肺脏局部细胞因子和炎症介质的释放［2］，肺泡膜的完整性破坏及通透性增加是根本原因。 细胞连接蛋白是维持黏膜上皮机械屏障和通透性的重要结构，主要包括Zo-1、Claudin 和Occludin 蛋 白 等［3］，其 中occludin 是 最 早 被 发 现 的组成紧密连接（tight junction，TJ）最主要的成分。 蛋白激酶C（PKC）是一种磷脂依赖的丝/苏氨酸激酶，有研究表明在occludin 蛋白功能的调节中，丝/苏氨酸的磷酸化状态较为重要。

1 材料与方法

1.1 标本采集 小鼠肺上皮细胞MLE-12（上海中国科学院细胞库），Flexcell 细胞应力加载系统FX-5000TM 及BioFLEX○R双向应力细胞培养板（Flexcell公司， 美国）， 兔抗大鼠Occludin 多克隆抗体、DMEM/F12 胎牛血清（Invitrogen 公司，美国），蛋白激酶C（PKC）抑制剂BisindolylmaleimideⅠ（批号：133052-90-1，Cayman 公司，美国），二甲基亚砜（批号：0231，Amresco 公司，美国），二氧化碳培养箱，超净工作台，Tanon-4500SF 全自动数码凝胶化学发光图像分析系统由山东省千佛山医院实验研究中心提供。

MLE-12 细胞生长于含10%胎牛血清的DMEM/F12 完全培养基中，在37 ℃、5%CO2的条件下培养，传代至稳定。 牵张前将MLE-12 细胞以1×105个/cm2的密度接种到Bio FLEX 弹性膜细胞培养板静置培养24～48 h， 再使用无血清培养基饥饿处理2 h。……