葛菲菲，吴 杰，李 鑫，刘 健，杨德全，鞠厚斌，周锦萍

（1.上海市动物疫病预防控制中心，上海201103；2.扬州大学生物科学与技术学院，扬州225009）

禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）为单股负链RNA病毒，基因组由8个基因节段组成。H9N2亚型AIV是中国大陆家禽中最普遍的AIV之一[1]，在家禽中稳定并持续存在，对养禽业造成严重损失和对人类健康构成严重威胁。其中G57基因型H9N2亚型AIV在2007年出现，并在2010年至2014年占据主导位置[2]。H9N2亚型禽流感病毒的6个内部基因节段是新型H7N9和H10N8亚型禽流感病毒的重配来源[3-4]。人H5N1、H7N9和H10N8亚型禽流感病毒的感染来源主要为活禽市场[5-7]。本研究对上海市活禽市场2018年6月分离到的6株H9N2亚型AIV进行全基因进化分析，为了解上海地区H9N2 AIV流行情况及其防控和候选疫苗选择提供有效的依据和参考。

1 材料与方法

1.1 病毒株 6株H9N2亚型AIV毒株由本实验室参照文献[8]分离保存，其详细背景见表1。

表1 本研究中6株 H9N2禽流感病毒毒株的信息Table 1 Information of the six H9N2 subtype Avian influenza virus isolates

1.2 实验动物及主要试剂 SPF鸡胚购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司；H9荧光RT-PCR试剂盒由深圳匹基生物工程股份有限公司提供；新城疫阳性血清、禽流感血凝素分型血清（H5、H9）由哈尔滨兽医研究所提供；AMV反转录酶等试剂均购自宝生物（大连）工程公司；特异引物由宝生物（大连）工程公司合成。

1.3 8个基因的扩增及序列分析 按照文献报道[9]的方法进行病毒RNA的提取和8个基因的全长扩增，测序由上海桑尼生物科技有限公司完成。参照GenBank中相关参考病毒株，利用Mega6.0软件进行序列的系统进化分析。

2 结果

2.1 全基因组同源性分析结果 6株病毒全基因片段的NCBI登录号为MK053830-053877。……