◎ 王 丽

（昆山市食品质量检测中心，江苏 昆山 215300）

恩诺沙星（Enrofloxacin，ENR），是一种动物专用抗生素，多用于奶牛养殖中部分疾病的预防以及治疗[1]，然而在奶牛体内由于有着较长的半衰期，从而导致其在奶牛体内代谢出环丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）。据相关研究表明[2]，ENR 在奶牛体内会在较短时间内就被代谢成为CIP，同时CIP 又会在奶牛分泌的乳液中存留较长一段时间。本研究试图借助胶体金免疫层析法（GICT）[3]来实现对牛奶中CIP 残留的快速检测，现将具体应用过程分享如下，以供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

市购牛奶；自制环丙沙星抗血清；环丙沙星（CIP）、恩诺沙星（ENR）、依诺沙星（ENO）和氧氟沙星（OFL），均购自上海源叶生物科技有限公司；卵清白蛋白（OVA）、牛血清白蛋白（BSA）、氯金酸和羊抗兔IgG，均购自安徽酷尔生物工程有限公司； N，N’-二环己基碳二亚胺（DCC）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、四甲基联苯胺（TMB）和硝酸纤维素膜，均购自瓦克化学有限公司。

1.2 仪器与设备

XYZ3020 三维划膜喷金仪（西宝生物科技股份有限公司）、DG-72AUTO 全自动切条机（仙锯金属加工机械有限公司）、ZNCL-BS 智能数显恒温磁力搅拌器（上海越众仪器设备有限公司）、DRP-9082 恒温培养箱（上海森信实验仪器有限公司）、imark 多功能酶标仪（济南好来宝医疗器材有限公司）以及 TDL-5G 冻离心机（山东博科科学仪器）。

1.3 方法

1.3.1 制备环丙沙星包被抗原

称取CIP（20.6 mg）溶于二甲亚砜（1 200 μL），再依次加入NHS（15.4 mg）和DCG（28.1 mg），室温进行5 h 的避光振荡，标记为A 液，于4 ℃环境下过夜。称取OVA 10.0 mg 溶于2 mL 的NaHCO3溶液 （0.1 mol·L-1），标记为B 液。取A 液上层清液逐滴加至B 液之中，期间于冰水混合物中对B 液不断进行振荡，直至产生沉淀即可停止滴加。……