程乐达,程 鹏,杨雄飞,王 娟,朱保玉

(郑州大学第一附属医院口腔颌面外科，郑州 450000)

鳞状细胞癌约占口腔和口咽部恶性肿瘤的90%。口腔鳞癌是头颈部最常见的恶性肿瘤。近年来口腔鳞癌的发病率急剧上升[1-2]。外泌体是由多泡小体形成的大小在50～110 nm的膜小泡，与质膜融合后由不同类型的细胞分泌[3]。外泌体在生理和各种病理条件下传递不同水平表达的信号分子。在生理状态或病理条件下，外泌体的内容物能准确地反映供体细胞的功能[4]。例如，外泌体将功能性RNA释放到细胞外间隙，这些核酸分子可以直接与靶细胞接触[5]。microRNAs是一种22个核苷酸左右的小RNA，是mRNA转录和翻译的重要调节因子。在先前的报道中，大量的microRNAs被证明与肿瘤的发生、发展存在密切的关系[6]。MiR-126-5p在结直肠癌及肺癌中被报道作为一种关键的microRNA影响癌症进展[7-8]。但这种microRNA是否可以通过外泌体在细胞间进行传递，目前尚无定论。

本研究探索了口腔鳞癌外泌体中miR-126-5p是否对肿瘤细胞生物学功能产生影响。结果表明miR-126-5p主要集中在外泌体中，并确定了miR-126-5p下游影响的靶蛋白NLRC3，发现通过外泌体传输的miR-126-5p可以抑制肿瘤细胞中NLRC3的表达，进而影响细胞的增殖、迁移及肿瘤生长。

1 材料与方法

1.1 细胞系及主要试剂

HEK293T细胞，人口腔角质细胞HOK及人口腔鳞癌细胞SCC4、SCC9均购自美国ATCC菌种保藏库。PCR 引物、miR-126-5p mimics和NLRC3 shRNA由金斯瑞生物科技有限公司设计并合成，SYBR®Green master mix及cDNA逆转录试剂盒购自美国TIANGEN公司，LipofectamineTM 2000转染试剂盒购自美国Invitrogeen 公司，双荧光素酶报告实验试剂盒购自……