凌学斌，王 军，綦苗苗，李继科，郭峻莉，李天发

（海南医学院第一附属医院心血管内科，心血管病研究所，海南海口570102）

细胞凋亡是引起心力衰竭的重要病理机制，常见诱因包括心肌缺血再灌注（ischemia/reper‐fusion，I/R）损伤、慢性压力负荷及充血性心力衰竭［1］。I/R 损伤常见于溶栓、冠状动脉介入或搭桥、心脏移植术等治疗中，是临床上治疗缺血性心脏病的常用方法，但可诱发心肌顿抑、再灌注恶性心律失常、心肌细胞凋亡及心脏收缩和舒 张 功 能 不 全［2］。 研 究 发 现 活 性 氧（reactive oxygen species，ROS）介导的氧化应激可进一步活 化MAPKs 通 路［3］，是 心 肌I/R 损 伤 的 重 要 病理 过 程。ROS 包 括O2•−、·OH、ONOO-、H2O2等，目前被认为是细胞内第二信使，影响着细胞增殖、分 化、凋 亡 及 坏 死 等 过 程［4］。MAPKs 为 丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，主要包括细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、氨基末端激酶（JNK）及p38，通过磷酸化下游产物调节细胞的生长、分化、对环境的应激适应、炎症反应。目前有关心肌细胞I/R 损伤的研究常使用具有成熟心肌细胞特性的H9c2 心肌细胞株，通过建立缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）模型来完成。H9c2细 胞 经H/R 处 理 后 可 激 活ROS/ERK［3］、ROS/JNK［3，5］及ROS/p38［6］通 路，进 而 诱 导 心 肌 细 胞凋亡。目前尚少有研究关注ROS 对ERK、JNK及p38 活性水平的表达是否存在差异以及缺氧、H/R 对上述通路是否存在影响。本研究通过CoCl2诱导H9c2 缺氧，使用完全培养基模拟I/R损伤病理过程，比较常氧、缺氧与H/R 条件下ROS 水 平、MAPKs 及Caspase-3 活 性 变 化，探 讨ROS/MAPKs 通路对H9c2 心肌细胞氧化应激损伤的作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

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