丁 伟，朱 薇，吕大伦，李 敏，端木龙胜

(1.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 烧伤整形科，安徽 芜湖 241001；2.皖南医学院 护理学院，安徽 芜湖 241002)

人恶性黑色素瘤，简称恶黑，是起源于皮肤黑色素细胞的恶性疾患，大约占皮肤所有恶性肿瘤的10%[1]，恶性程度极高，我国晚期恶黑患者5年生存率仅为24%～29%[2]。本病病因及机制不完全清楚，与恶黑早期诊治相关的发病机制研究包括生物标志物等近年来多有涉及，到目前为止，文献报道多种长链非编码RNA (lncRNA，>200 bp)与恶黑发病或肿瘤增殖相关[3]。

肺癌相关转录本1(lung cancer associated transcript 1，LUCAT1)位于5号染色体，2013年首次在非小细胞肺癌细胞中发现[4]，目前LUCAT1与恶黑之间的关系文献报道较少，本研究运用生物信息学方法验证LUCAT1在恶黑中的表达，通过qRT-PCR技术对比检测人恶黑细胞SK-MEL-1、A375和正常人表皮黑色素细胞HEMn-LP中LUCAT1的表达情况；并通过siRNA技术下调LUCAT1表达，运用细胞形态学及MTT实验探索LUCAT1对细胞生长能力的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器 qRT-PCR试剂盒购自大连Takara公司。RNA抽取所用Trizol 试剂盒购自上海碧云天生物科技公司。转染所用脂质体2000试剂购自Invitrogen公司。MTT细胞增殖试剂盒购自上海科雅生物公司。高糖DMEM培养基、Opti-MEM无血清培养基、胎牛血清均购自Gibco公司。酶标仪来自Tecan infinite，型号M2009PR。Real time PCR 仪器为Roche公司LightCycler 480。荧光显微镜为奥林帕斯公司IX71。

1.2 细胞培养及转染 人恶黑细胞SK-MEL-1、A375以及正常人表皮黑色素细胞HEMn-LP来自中科院上海细胞库。SK-MEL-1细胞最初提取自一位淋巴结转移性恶黑的29岁男性患者，低转移性A375细胞从一54岁女性皮肤恶黑分离获得，正常人表皮黑色素细胞HEMn-LP是从正常新生儿浅色素包皮组织分离获得的表皮黑素细胞。所……