李 琪，张小强*，陶一凡，朱孟雯，崔丹丹，孙腾腾

(东南大学 1.公共卫生学院； 2.环境医学工程教育部重点实验室， 江苏 南京 210009)

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种以细胞外β淀粉样斑块沉积、细胞内神经原纤维缠绕形成以及神经细胞死亡为病理特征的神经退行性疾病[1]。阿尔茨海默病患病人数的急剧上升给经济带来巨大负担，预防和控制阿尔茨海默病有重要意义。

Wnt信号通路对细胞增殖、分化、凋亡及细胞极性、肿瘤细胞的迁移和侵袭都有影响，经典Wnt信号通路在维持神经系统和神经元发育中起着重要作用[2-4]。大量研究显示Wnt/β-catenin信号通路的失调在AD多种病因中发挥作用[5-6]。

原花青素(proanthocyanidins, PC)是一种具有抗炎、抗氧化，能够减缓衰老的多酚类物质，对神经损伤有显著的保护作用[1, 7-8]。关于PC对神经系统疾病保护作用的机制尚未完全阐明。本研究以β淀粉样肽(amyloid-β peptide，Aβ)Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞，探究PC对糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase 3β，GSK-3β)、β-连接蛋白(β-catenin)以及Aβ1-42表达水平的影响，并观察应用Wnt/β-catenin信号通路内源性阻断剂Dickkopf-1(Dkk1)后各指标的变化情况，旨在为拓展PC应用领域，预防阿尔茨海默病提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系：人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y(中国典型培养物保藏中心)。

1.1.2 药品及主要试剂：原花青素(纯度>95%)(上海阿拉丁生化科技有限公司)；Aβ25-35(纯度>99%)(ApexBio公司)；重组人Dkk1(Peprotech公司)；DMEM高糖培养基(Hyclone公司)；胎牛血清(ClarkBio公司)；MTT试剂(Sigma-Aldrich公司)；BCA蛋白浓度试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；人淀粉样肽(Aβ1-42)ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)；β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β抗体和二抗m-IgGκ BP-HRP(Santa Cruz公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞的培养及分组处理：将SH-SY5Y细胞培养于含10%胎牛血清、1%青霉素与链霉素的DMEM完全培养基中，置于5% CO2、37 ℃恒温培养箱中孵育，当细胞汇合度达到80%～90%时进行传代。分为……