马家玲，高艳平

(张家港市第一人民医院 苏州大学附属张家港医院 麻醉科， 江苏 张家港 215600)

大脑海马对缺血缺氧非常敏感，是大脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的好发部位之一，而大脑海马神经元受损会引起认知功能障碍，是脑损伤的主要表现之一[1]，故抑制海马神经元受损，是缓解I/R脑损伤的重要手段之一。目前研究发现，线粒体自噬与脑I/R损伤关系密切，其自噬不足或过度激活均可导致神经元细胞变性和死亡而加重脑损伤[2]。研究证实miR-183可抑制自噬并刺激细胞凋亡[3]，且miR-183也可在大脑皮质中特异性表达，并参与神经细胞分化和调控[4]。但miR-183抑制线粒体抑制自噬对I/R脑损伤过程海马神经元的影响，报道较少。腺病毒基因Bcl-2同源蛋白[B-cell leukemia/lymphoma 2(Bcl-2)/adenovirus E1B interacting protein 3-like，BNIP3L]是介导脑内线粒体自噬，减轻脑缺血损伤的必须成分[5]。但Bnip3l与miR-183的靶向作用还尚不清楚，本研究建立双荧光素酶报告试验对两者的靶向作用，进行验证，并复制海马神经元细胞(HT-22)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型来模拟I/R损伤模型，探讨miR-183靶向调控Bnip3l表达对海马神经元细胞线粒体自噬的影响及作用机制，以期阐明I/R脑损伤的分子生物学机制，为临床研究提供可靠资料。

1 材料及方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系:小鼠源海马神经元细胞系HT-22(ATCC：American Type Culture Collection)。

1.1.2 主要试剂:miR-183激动剂(miR-183 mimics，Signosis公司)及阴性对照(miR-183NC)(System Biosciences公司)；四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)(Sigma-Aldrich公司)；Trizol试剂盒(北京麦瑞博公司)；反转录RT试剂盒(武汉纯度生物科技有限公司)；DMEM 高糖培养基(Hyclone 公司)；BCA 蛋白定量试剂盒、胰蛋白酶(Pierce 公司)；泛素和LC3结合蛋白p62(ubiquitin-and LC3-binding protein p62，p62)抗体(北京博奥森生物技术有限公司)；……