周 鸿，邓 健，杨 锋，余 杰，胡林旺*

(湖南省人民医院 1.神经外二科，2.药学二部，湖南 长沙 410002)

突触间隙内谷氨酸的过量蓄积导致的兴奋性毒性是缺血性脑损伤(ischemic brain injury，IBI)的重要机制之一，并且是神经二次损伤和病后转归主要的不良因素[1]。胶质细胞谷氨酸转运体-1(glial glutamate transporter 1，GLT-1)承担了约90%的中枢神经系统的谷氨酸转运，且80%以上的GLT-1表达于海马[2]。海马CA1区对缺氧缺血最为敏感，且海马CA1区锥体层神经元损伤会导致认知、学习和记忆功能障碍，直接导致IBI患者的不良预后[3]。因此，研究海马CA1区GLT-1的表达与功能对研究IBI后的兴奋性谷氨酸毒性反应至关重要。

在IBI患者脑脊液中食欲素A(orexin-A，OX-A)含量降低，且OX-A低含量与IBI严重程度呈正相关[4]。侧脑室注射OX-A能降低脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型大鼠的脑梗死体积[5]。以上现象提示：OX-A可能具有抗IBI的效应。而OX-A对短暂性全脑缺血(transient global cerebral ischemia，tGCI)中GLT-1的表达、转运活性以及对谷氨酸摄取能力仍不清楚，因此本研究观察侧脑室注射OX-A对tGCI大鼠海马CA1区GLT-1表达与功能的影响，并分析其机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物与试剂

30只7周龄SPF级雄性SD大鼠[长沙市天勤生物技术有限公司，SCXK(湘)2019-0014]；OX-A试剂和LY294002[phosphotidylinsitol-3-kinase(PI3K)抑制剂]试剂(MedChemExpress公司)；谷氨酸定量试剂盒和硫堇溶液(北京索莱宝生物科技有限公司)；Fluro-Jade C(FJ-C)染色试剂盒(Chemicon公司)；膜蛋白提取试剂盒(上海生工生物工程有限公司)；[3H]-glutamate试剂(PerkinElmer公司)；DHK试剂(Sigma-Aldrich公司)；NeuN、GLP-1、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT抗体(Cell Signaling Technology公司)；BCA蛋白定量试剂盒、ECL化学发光试剂盒、GAPDH抗体和HRP标记二抗(上海碧云天生物技术有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠的分组及处理：将大鼠随机分为假手术(sham)组(n=6)和tGCI造模组(n=24)。……